江南大学1990-2009年生物化学历年真题部分问范文.doc

1、五只试剂瓶中分别装的是核糖、葡萄糖、果糖、蔗糖和淀粉溶液，试用最简便的化学方法鉴别。 答：依次使用下列化学试剂进行鉴定 2、某一已纯化的蛋白无SDS的凝胶电泳图如下所示，两种情况下的电极槽缓冲液都为8.2 从下面两副图给出的信息，有关纯化蛋白的结构你能得出什么结论？该蛋白的PI是大于还是小于8.2？ 答：非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质时主要是根据各组分的pI的差别。 图（a）的结果只呈现单一的带，根据题中给出的条件，表明该蛋白质是纯净的。 由于SDS是一种带负电荷的阴离子去垢剂，并且具有长长的疏水性碳氢链。它的这种性质不仅使寡聚蛋白质的亚基拆离，而且还能拆开肽链的折叠结构，并且沿伸展的肽链吸附在上面。这样，吸附在肽链上的带负电荷的SDS分子使肽链带净负电荷，并且吸附的SDS量与肽链的大小成正比。结果是，不同大小的肽链将含有相同或几乎相同的q/r值。由于聚丙烯酰胺凝胶基质具有筛分效应，所以，分子较小的肽链将比较大的、但具有相同的q/r值的肽链迁移得更快。若蛋白质是由单一肽链或共价交联的几条肽链构成（在不含β-巯基乙醇的情况下），那么在用SDS处理后进行SDS，其结果仍是单一的一条带。若蛋白质是由几条肽链非共价结合在一起，在用SDS处理后进行SDS，则可能出现两种情况：一种仍是一条带，但其位置发生了变化（迁移得更快），表明此蛋白质是由几条相同的肽链构成，另一种可能出现几条带，则可以认为该蛋白质是由大小不同的几条肽链构成。图（b）的结果表明该蛋白质是由两种大小不同的肽链借非共健结合在一起的寡聚体蛋白质。从图（b）的电泳结果我们可以断定该蛋白质的等电点低于8.2。 3、含有以下四种蛋白质混合物：A，分子量12000，pI=10；B，分子量62000 ，pI=3；C，分子量28000，pI=7；D，分子量9000，pI=5。若不考虑其他因素，当它们（1）流过DEAE-纤维素阴离子交换柱时，用线性盐洗脱时。（2）流经SephadexG-75凝胶过滤柱时，这些蛋白质的洗脱顺序如何？阴离子交换柱起始pH可选择什么范围。 答：（1）流过DEAE-纤维素阴离子交换柱时，洗脱下柱的顺序为等电点依次下降的顺序：A→C→D→B。阴离子交换柱最先洗脱下来的是碱性蛋白质，然后中性蛋白质，最后酸性蛋白质。 （2）流经SephadexG-75凝胶过滤柱时，按相对分子质量从大到小的顺序被洗脱下来：B→C→A→D。 PH范围：3PH10 4、请解释什么是酶的活力和比活力，并说出这两个指标在酶的纯化过程中可以说明什么。答：酶活力也叫酶活性，可以用酶活力单位表示，国际酶活力单位（U）的定义是在最适条件下，1min内转化1μ mol底物所需要的酶量，或者是转化1μ mol的有关基因的酶量（1 IU=1μ mol/min）。另一个酶活力国际单位（Kat）的定义为：在最适条件下，每秒钟能催化1mol底物转化为产物所需的酶量（1Kat=1 mol/S）。酶活力是由酶催化一定反应的能力决定的，只是酶催化能力的大小，没有具体量的概念，酶活力与总体积或总质量的乘积所代表的总活力则引入量的概念。每一纯化步骤后存留的总酶活力占化步骤后存留的总酶活力占第一次总活力的百分比可以反映回收率。比活力是指单位质量（mg蛋白）的酶制剂的酶活力单位数，酶的比活力反应酶的纯度，以及计算纯化倍数。判断酶分离纯化的优劣有两个指标来衡量，一是总活力的回收；二是比活力提高的倍数。总活力的回收表示提纯过程中酶的损失情况，活力提高的倍数表示提纯方法的有效程度。5、有一份核酸样品，可能含有少量蛋白质，只允许测定一种元素即可确定其有无蛋白质污染，您选哪一种元素，为什么？ 答：确定有无蛋白质污染，只需测定样品中是否含有只存在于蛋白质而不存在核酸的元素，如果样品有此元素存在，很明显说明存在蛋白质污染，满足此条件的是硫（S），核酸一般不含硫，而大多数蛋白质含硫。6、某种溶液中含有三种三肽：Tyr-Arg-Ser，Glu-Met-Phe和Asp-Pro-Lys，α-COOH基团的pKa为3.8；α-NH3基团的pKa为8.5。在哪种pH（2.0,6.0或13.0）下，通过电泳分离这三种多肽的效果最好。（10分） 答：pH 6.0效果好。pH6.0能提供更好的分辨率。pH6.0时，3种肽（Tyr-Arg-Ser，Glu-Met-Phe和Asp-Pro-Lys）都带有不同的电荷，净电荷分别是+1、-1和0；而在pH 2.0时净电荷分别是+2、+1和+2；在pH13.0时净电荷分别是-2、-2和-2。 7、比较底物水平磷酸化和氧化磷酸化的主要异同点。 答：底物水平磷酸化是指产物氧化还原反应过程中，分子内部能量重新分布，使无机磷酸酯化。形成高能磷酯健，后者在酶的作用下能将能量转给ADP，生成ATP；氧化磷酸化