工业微生物选育.ppt

5‘…G-C-T- C-T-G-C-A-G-G-A-G…3’ 3‘…C-G-A-G-A-C-G-T-C-C-T-C…5’ （2） DNA连接酶 DNA连接酶：催化DNA相邻的5 ′-P基团和3 ′-OH末端之间形成磷酸二酯键，将DNA单链缺口封合起来的酶。 OH P DNA连接酶 5‘…G-C-T- C-T-G-C-A G-G-A-G…3’ 3‘…C-G-A-G A-C-G-T-C-C-T-C…5’ OH P DNA连接酶只能封闭双螺旋DNA骨架上的缺口(nick)，即双链DNA上的某一条链上两个相邻核苷酸之间失去一个磷酸二酯键所出现的单链断裂，而不能封闭裂口(gap)，即在双链DNA的某一条链上失去一个或数个核苷酸所形成的单链断裂。 1）DNA连接酶的种类 目前常用的DNA连接酶有大肠杆菌DNA连接酶和T4连接酶。 大肠杆菌DNA连接酶只能催化双链DNA片段互补粘性末端之间的连接。 T4连接酶可用于双链DNA片段互补黏性末端之间的连接，也能催化双链DNA片段平末端之间的连接，但平末端之间的连接效率比较低。 2）粘性末端DNA片段的连接 具粘性末端的DNA片段的连接容易发生自我环化作用，并在连接酶的作用下重新变成稳定的共价闭合的环形结构。这样，就会使只含有载体分子的转化子克隆的“本底”比例大幅上升，最终给重组DNA分子的筛选工作带来麻烦。 用碱性磷酸酶预先