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流式細胞仪操作规程sop
流式细胞仪操作规程目录
1:淋巴细胞亚群测定
2:HLA-B27测定
3:CD55/CD59测定
4:血小板抗体测定
5:红细胞抗体测定
6:粒细胞抗体测定
7:白血病免疫分型测定
8:淋巴细胞T细胞亚群细胞内因子IFN-γ/IL-4测定
9:XL操作步骤
淋巴细胞亚群测定
(流式细胞仪)
医院检验科
操作规程文件号:
200 年 月 日起实施
第1版
(共3页)
本规程每2年复审一次
复审日期: 年 月 日
复审人:
规程编写者:
审 批 者:
批准日期: 年 月 日
文件分发部门和/或个人
院档案室保管者:
检验科 主任:
检验科 实验室:
淋巴细胞亚群测定
(CD系列)
方法
流式细胞仪(BeckmanCoulter,贝克曼库尔特) 原理:
双/三色直接免疫荧光法。荧光素标记的各种单克隆抗体加入到全血中,与白细胞膜上相应的抗原结合,经过溶血、洗涤(和固定)等步骤后,在流式细胞仪上进行分析,从而得到淋巴细胞亚群的百分数。淋巴细胞表面抗原分布如下:T淋巴细胞:CD3+;B淋巴细胞:CD5+,CDl9+;辅助性T淋巴细胞:CD3+CD4+;抑制性T淋巴细胞:CD3+CD8+;NK细胞:CD3-CDl6+56+等。根据淋巴细胞膜上CD分子表达的不同,流式细胞仪可以分辨出淋巴细胞及其各种不同的亚群,利用计算机软件计算出淋巴细胞亚群的百分数。 标本采集与处理
受检者的准备 检查对象生活饮食处于日常状态,空腹采血。
采集部位 静脉采血
抗凝剂 EDTA或肝素抗凝血
要求 1.样本量至少1ml。
2.样本应在采集后6小时内处理,冷冻的标本不能用。
3.样本白细胞计数应在4.0-10.0×109/L之间。若10.0×109/L, 样本需要稀释,用PBS稀释;若4.0×109/L,应分离单个核 细胞。
4.溶血样本不能用。 试剂
品牌 剂型 规格 贮存
贝克曼库尔特
成分 1:单克隆抗体 液体 1ML 2—8℃
2:全血溶血试剂 液体
A:甲酸 液体 70ML 室温
B:碳酸钠等 液体 32ML 室温
C:多聚甲醛 液体 14ML 室温
3:鞘液 液体 20L 室温
4:清洗液 液体 5L 室温
5:荧光微球 液体 10ML 2-8℃
质控品 BEKAMANCOULTER产品,未开瓶的试剂于2-8℃保存,可在有效期内保持稳定,稀释的试剂于2-8℃可稳定2周;每天校准一次:遇特殊情况随时进行校准。
仪器
BeckmanCoulter EPICS XL/FC500/Altra 样本制备:
1)按照要求,分别向已编好号的试管中加入20 ul单克隆抗体和同型对照
2)分别向试管中加入混匀的100u1抗凝血。
3)混匀,避光,室温孵育20-30分钟
4)溶血:a. OptiLyse C(按说明书步骤溶血)
b. 使用COULTER Q—PREP制备系统
开机---显示READY灯亮---选择35SEC灯亮---开门---放入试管关门---自动进行溶血---显示READY灯亮---开门---取出试管---再进行下一个样品测定。
(*溶血前确认A/B/C管路充满并能打出液体)
5)上机测样(可根据样本情况选择洗或不洗上样) 报告结果
报告百分数(和绝对值) 操作性能
精密度 批内五次重复CV2%
灵敏度 500—1000个荧光素分子 参考值(百分数(绝对值))
CD3+ 60.8-75.4%(1141-1880) CD4+ 29.4-45.8%(478-1072)
CD8+ 18.2-
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