实验五酶联免疫吸附试验讲义.pptVIP

实验五 酶联免疫吸附试验 酶标抗体技术： 酶标抗体技术（Enzymelabelled antibody technic）是用酶标记抗体分子，进行抗 原抗体检测的技术，也叫免疫酶技术。 【原理】 酶是一种有机催化剂，酶与底物结合在有供 氢体（显色剂）存在时，出现显色反应。 酶在一定的条件下能与抗体分子结合形成酶 标抗体，这种结合既不影响酶本身的催化特 性，又不影响抗体与抗原的特异性结合，当 酶标抗体与抗原结合后，加入酶作用的底物 及供氢体，抗原存在的部位即可出现显色反 应。此种反应可用肉眼观察或用分光光度计 测出。 酶标抗体技术的用途： 酶标抗体技术可用于抗原或抗体的定 性、定量及定位检测。 反应中的酶及底物： 标记抗体的酶——辣根过氧化物酶（HRP） 底物——过氧化氢(H2O2) 供氢体——二氨基联苯胺(DAB) 邻苯二胺(OPD) 四氨基联苯氨（TMB） 【常用的酶标抗体技术】 免疫酶组化染色技术（组化法） 酶联免疫吸附试验(ELISA) （一）组化法 是用酶标抗体对标本染色,加底物和显色剂后,在显微镜下观察,抗原存在的部位出现棕黄色反应。 直接法——用酶标记抗体直接染色 间接法——用酶标记抗抗体间接染色 （二）ELISA 是