实验3_凝胶过滤法使蛋白质脱盐讲义.pptVIP

实验三 凝胶过滤法使蛋白质脱盐 山东师范大学生命科学学院 【器材与试剂】 （一）器材 1. 层析柱 (15mm×300mm） 2. 铁架台 3. 滴定管夹 4. SephadexG－25 5. 刻度吸管 （二）试剂 1. 样品溶液 蛋白质－硫酸铵溶液 2.10％黄柳酸 3.钠氏试剂 4.洗脱液（去离子水） * * 生物化学实验之－－ 【实验原理】 凝胶层析又称分子筛层析、排阻层析或凝胶过滤，是以凝胶为载体，根据蛋白质的大小和形状，即蛋白质的相对分子质量进行分离和纯化。 该方法广泛用于生物大分子的分离、纯化、浓缩等。 【实验目的】 学习凝胶过滤法分离纯化蛋白质的原理与操作技术 凝胶是一类具有多孔立体网状结构的不溶性珠状颗粒。多是交联的聚糖(如葡聚糖或琼脂糖)类物质，用它来进行物质分离，主要是根据多孔凝胶对不同相对分子质量的物质具有不同的排阻效应实现的。 葡聚糖凝胶的商品名称为Sephadex，它具有三维空间的多孔网状结构，呈珠状颗粒。 本实验用G-25使蛋白质与(NH4)2SO4分离，当蛋白质的盐溶液进入葡聚糖凝胶时，小分子的(NH4)2SO4扩散进入G-25的网孔中，而大分子的蛋白质