生命科學综合实验报告zz.docVIP

生命科学综合实验报告 名称：绿色荧光蛋白基因的原核克隆与表达 姓 名： 蔡晓丽 班 级： 生082-1 学 号： 200821503101 组 别： 一组 实验台号： 一 指导教师： 曾勇 实验日期： 2011/11/14—2011/11/17 同组成员： 张瀚林 严凤莲 许慧 孙伟伟 绿色荧光蛋白基因的原核克隆与表达 一 实验目的 1、了解表达用基因克隆引物设计的原理和方法。 2、了解利用原核表达系统表达外源基因的原理、流程及方法。 3、掌握PCR、DNA片段的酶切与连接、细菌转化、阳性克隆筛选、质粒提取、DNA样品的纯化、核酸电泳等分子生物学基本技术。 二 实验原理 pET原核表达系统,目的基因被克隆到 pET质粒载体上，受T7启动子控制；T7启动子受宿主细胞编码的T7 RNA聚合酶控制；宿主T7 RNA 聚合酶基因位于乳糖操纵子中，具有可调控性。 将外源基因克隆在含有T7启动子的pET23b(+)表达载体中，让其在E.coli(BL21DE3)中表达。先让宿主菌生长，然后向培养基中加入lac操纵子的诱导物IPTG(异丙基硫代-β-D-半乳糖 )或乳糖，（IPTG与乳糖操纵元的阻遏蛋白结合，使乳阻遏蛋白的空间构像变化，四聚体解聚成单体，失去与操纵子特异性紧密结合的能力，从而解除了阻遏蛋白的作用