毕赤酵母高表达策略概述.docVIP

- 毕赤酵母高效表达策略概述 1.基因的内在特性 主要包括mRNA 5’端非翻译区(5’2 U TR)、基因的A +T 组成和密码子的使用频率3 个方面。由于巴斯德毕赤酵母中乙醇氧化酶的表达量极高(占胞内可溶蛋白的30% 以上) 因此为了有高的蛋白表达量,维持外源基因mRNA 5’－U TR。尽可能和AOXlmRNA 5’－U TR 相似是必需的, 最好是保持两者一致。A + T 含量高的基因在巴斯德毕赤酵母中表达时偶尔会造成转录提前终止,这是因为A T 丰富区可能存在转录提前终止信号。因此对A T 含量丰富的基因最好是重新设计序列, 使其A + T 含量在30%～ 55% 范围内。 巴斯德毕赤酵母也有特殊的密码子偏好趋向。（赵翔,霍克克,李育阳. 毕赤酵母的密码子用法分析[J ] . 生物工程学报,2000 ,16(3) :308 - 311.） 外源蛋白自身的理化特点也影响其表达和分泌。外源蛋白的加工修饰都会影响蛋白的表达量。 2．选择强启动子 启动子在转录水平上调控基因的表达最常用的启动子是AOXI 启动子。PGAG(三磷酸甘油醛脱氢酶启动子) 是最近在巴斯德毕赤酵母中克隆到的一个组成型启动子,在它的控制下β- LabZ 基因表达率比甲醇诱导下的PAOX驱动的产量更高,由于该组成型启动子不需要甲醇诱导,发酵工艺应该更简单,同时其产量更高,所以成为代替PAOX1 最有潜力的启动