凝胶层析纯化苯丙氨酸解氨酶导论.ppt

实验（二）凝胶层析纯化苯丙氨酸解氨酶（8学时） 一、实验背景 掌握凝胶柱层析法脱盐的原理和基本操作方法，分离上一个实验所得沉淀液中的酶蛋白和硫酸铵。 二、实验原理 分子筛： 根据不同蛋白分子量大小的差异进行分离的一种简单可靠的层析技术。 空间排阻 1. Spherical particles packed into a column. 2. Sample applied. 3. Buffer (mobile phase) and sample move through column. Molecules diffuse in and out of matrix 4. Large molecules leave the column first followed by smaller molecules in order of size. Molecules larger than the matrix pores pass straight through. Diffusion Buffer Diffusion into the pores Diffusion out of the pores Buffer 纯化应用 组分离（Group separations ） 脱盐/换缓冲液（desalting, buffer exchange, removing reagents） 精细