質粒转染后luciferase检测操作手册.docVIP

质粒转染后luciferase检测 操作手册 实验流程描述 培养生长状态良好的293T细胞，质粒转染前一天将细胞分入24-well培养板培养，转染当天按实验设计的组别进行质粒转染实验。转染24小时后荧光显微镜下观察细胞内荧光标记基因（如GFP）的表达情况，然后使用“Dual-Glo? Luciferase Assay System（E2920，promega）”试剂盒处理细胞、进行luciferase表达检测。 实验材料： 试剂 试剂名称 试剂来源 cat.No. 胎牛血清 FBS GIBCO DMEM GIBCO 胰酶 上海化学试剂公司 Opti-MEM Invitrogen Dual-Glo? Luciferase Assay Syste E2920 仪器 仪器名称 仪器来源 cat.No. 荧光显微镜 奥林帕斯 micropublisher 3.3RTV CO2培养箱 日本三洋 SANYO MCO-175 生物安全柜 上海振样创空气净化设备公司 Bio 1200-Ⅱ-A2 实验步骤： 1. 准备目的细胞 1.1 细胞复苏 1) 从液氮罐中取出细胞冻存管 2) 迅速放入37℃水浴中，并不时摇动使其尽快解冻 3) 完全解冻后，1000 rpm，离心2 min 4) 75%酒精擦拭冻存管消毒后，移至超净台 5) 吸去冻存液上