04-2014级硕士高级免疫学实验技术-ELISA概述.ppt

高级免疫学实验技术 2014级硕士研究生 吉林大学基础医学院 免疫学系 酶联免疫吸附试验(Enzyme linked immuno-sorbent Assay, ELISA) 间接法-测抗OVA抗体的效价 实验原理 实验分组、试剂与器材 试剂： 封闭液(1%PBS-脱脂奶粉) 7ml 洗液(PBS-Tween20) 1瓶 抗OVA抗体 ml 酶标抗体(HRP-GaM) 5ml 底物 5ml 终止液(H2SO4) 2.5ml 器材： 酶标板 1块 200?l pipette 1把 1000 ?l pipette 1把 Tip (大/小) 若干 1.5ml EP管 若干 培养箱43℃ 1个 吸水纸 若干 四人一组，每人做一排 注意事项 清点好实验物品 加样器的正确使用 加样器头不能混用，尤其是吸酶和底物 底物应现用现配 包被：用0.05M PH9.6碳酸盐包被缓冲液将抗原(OVA，10?g/ml)稀释。 100 ?l/well加入聚苯乙烯酶标板中，4℃ over night。 封闭：次日，弃去孔内溶液。加入150 ?l/well 　1%PBS-脱脂奶粉(封闭液), 43℃ for 60mins。 加样：弃去封闭液，加倍比稀释的抗OVA抗体100 ?l/