电镜技术一.pptVIP

目前，用于生命科学研究的电子显微学发展有两个趋势。 一是向更微细的结构，生物分子和原子水平发展。电镜已成为分子生物学、分子遗传学非常重要的研究工具之一，用于细胞生物学、生物分子结构与功能关系以及抗原、抗体、蛋白质、DNA定位等研究，例如对微管分子的研究、膜抗原的超微定位、膜抗原基因对核及细胞骨架系统蛋白质组成的影响、细胞核内DNA、组蛋白、非组蛋白的分子观察和定位以及核孔复合体识别蛋白质的观察等等，都取得了非常突出的进展。 另一个重要趋势是向更普及的应用方向发展，如农林、医药、动植物学等。在应用方面最引人注目的是病理诊断电子显微学。它已成为一些病毒，如某些肿瘤和病毒病诊断上必不可少的工具。自从微波技术引入诊断电镜学以后，病理样品从取材到电镜观察只需2小时左右；免疫电镜、电镜组化等技术均已引入常规诊断学中。　 扫描电镜向高分辨率与低电压方向发展。日本人改进了常规的扫描电镜，设计了新型超高分辨率扫描电镜UHST1型，系统地改良了生物样品的制备技术，关键是免除了金属喷镀的基本制样过程，而用小而薄的样品，使用“导电染色”，如用醋酸铀水溶液浸染，以逐级乙醇脱水，在临界点干燥，以“抛光的碳平板”(polishedcarbonplate)作为样品的载体，在电压15KV条件下可以获得超高分辨的扫描电镜图像，达到优于0.8nm的分辨力。不仅可以分辨出核糖体的大、小亚基，并可见到串连于诸多核糖体之间的mRNA的纤细丝状结构，能看见DNA分子双螺旋结构及其大沟与小沟。这一进展令人鼓舞，它使生物大分子的三维图像直接展现在人们眼前。　 扫描电镜的应用主要表现在以下几个方面： 1 表面及断口形貌观察 　　扫描电镜在观察表面及断口形貌方面的优势是人们公认的，它可以直接观察样品表面及断口，不需要像透射电镜那样进行复杂的样品制备，可以对样品表面及断口在很宽的倍率范围内进行连续观察。即可以进行低倍的大范围扫描，又可以对某些感兴趣的区域进行高倍扫描，显示表面及断口形貌特征，揭示机理。 2 观察纳米材料 　 所谓纳米材料就是指组成材料的颗粒或微晶尺寸在0.1-100nm范围内，在保持表面洁净的条件下加压成型而得到的固体材料。纳米材料具有许多与晶体、非晶态不同的、独特的物理化学性质。纳米材料有着广阔的发展前景，将成为未来材料研究的重点方向。扫描电镜的一个重要特点就是具有很高的分辨率。现已广泛用于观察纳米材料。 3 进行动态观察 　在扫描电镜中，成象的信息主要是电子信息，根据近代的电子工业技术水平，即使高速变化的电子信息，也能毫不困难的及时接收、处理和储存，故可进行一些动态过程的观察，如果在样品室内装有加热、冷却、弯曲、拉伸和离子刻蚀等附件，则可以通过电视装置，观察相变、断烈等动态的变化过程。 4 元素分析 由于扫描电镜具有上述特点和功能，所以越来越受到科研人员的重视，用途日益广泛。现在扫描电镜已广泛用于材料科学（金属材料、非金属材料、纳米材料）、冶金、生物学、医学、半导体材料与器件、地质勘探、病虫害的防治、灾害（火灾、失效分析）鉴定、刑事侦察、宝石鉴定、工业生产中的产品质量鉴定及生产工艺控制等。 当前生物电镜应用的主要方向： 生物微结构形态研究 生化物质和基因产物细胞定位 生物材料的X射线元素分析 结构生物学 透射电子显微镜的应用 TEM样品的制备 生物样品常规制样技术 超薄切片技术：取材、固定、清洗、脱水、浸透、包埋、切片及染色等步骤。 负染色技术：利用高密度的、且在透射电镜下又不显示结构的重金属盐（如磷钨酸、醋酸铀等），把生物标本包围起来、在黑暗的背景上显示出呈现阴性反差样品的微细结构。 生物微结构形态研究 （1）许多生物的微细结构尚不清楚，特别是农业生物、 水生生物、资源性生物 （2）与生理功能研究相结合，研究不同条件处理下的微 结构变化 （3）采用新技术得到的结构信息与传统技术差别 （4）医学诊断电镜仍有重要价值 肌肉 肾 上图：肝内胆管细胞癌，癌细胞胞质内微腔(MC)，内衬丰富微绒毛(MV) 左图：肝炎后肝硬化，肝细胞窦周间隙及肝细胞侧面间胶原原纤维明显增多 上图：心肌细胞线粒体肿胀，表现为灶性空化 上图：心肌细胞线粒体(M)肿胀，表现为内室肿胀，崤减少，形成较宽的电子透亮区 上图：小肠上皮细胞高尔基复合体增生，图中见有多套高尔基复合体(Go)，占据相当广的面积。 上图：空肠上皮细胞高尔基复合体之囊泡扩张 上图：腺癌细胞胞质内微腔内衬许多微绒毛 上图：腺癌细胞表面含有许多微绒毛 细胞中的病毒颗粒 动物病毒图片 左下图：细小病毒0091MPV17 右上图：副黏病毒 右下图；腺病毒0088H91D16 右上、下图：示