第三章细胞培养的基本方法摘要.pptVIP

第三章 细胞培养的基  本方法 第一节 无菌操作技术 第二节 培养细胞的观察 第三节 细胞培养中常用的染色方法 第四节 细胞培养的污染和检测 教学目的和要求 重点和难点： 掌握细胞培养中无菌操作技术及操作过程中需要注意哪些问题； 预防污染是无菌操作的关键。 第一节 无菌操作技术 由于体外培养的细胞没有抗感染能力，因此防污染是决定培养成功的首要条件。即便使用设备完善的实验室，若实验者粗心大意，技术操作不规范,也会导致污染。一切操作需要保证无菌和有条不紊。组织培养中最重要的，也是最基本的要求就是各项操作均应从无毒害、无污染的培养环境来考虑。培养基、器皿材料、接种工具、操作环境、培养室和超净工作台等各个环节都应注意。 培养玻璃器具的洗涤是非常重要的。用完后应洗净，再用蒸馏水冲一遍，烘干； 用合适的方法灭菌。 （二）无菌操作室 工作前后室内清扫、拖地，以防菌在空气中流动，特别真菌孢子。使用前，室内及超净工作台紫外灯杀菌30分钟，超净工作台酒精（75%）杀菌，工作中一直吹风。 三、洗手和着装 原则上和外科手术相同。平时仅做观察不做培养操作时，可穿着细胞培养室内紫外线照射30min的清洁工作服。在利用超净台工作时，因整个前臂要伸入箱内，应着长袖的清洁工作服，并于开始操作前要用75％酒精消毒手。如果实验过程中手触及可能污染的物品和出入培养室