第9章酶促反应动力学摘要.pptVIP

Vmax和k3（kcat）的意义 当[S]很大时,v=vmax=k3[Et] K3 表示当酶被底物饱和时每秒钟每个酶分子转换底物的分子数，这个常数又叫转换数，称为催化常数（kcat）， kcat越高，表示酶的催化活力越高，所以，Vmax=kcat[E] ES →E+P k3 kcat/Km 的意义 生理条件下，大多数酶并不被底物所饱和，体内 [S]/Km 介于0.01~1 之间。 v= Vmax ×[S] Km+[S] Vmax=kcat[Et] v= kcat[Et] ×[S] Km+[S] 当[S]Km时，自由酶浓度=Et v= kcat Km [E][S] 比较不同酶或者同一种酶催化不同底物的催化效率 2.3 作图法测定Km和Vmax 斜率=Km/Vmax -1/Km 1/Vmax 作图法测定Km和Vmax——双倒数作图法 将米氏方程取双倒数： = v= Vmax ×[S] Km+[S] 2.4 多底物酶促反应动力学 大多数酶反应包含一种以上的底物： A+B→P+Q 序列反应-有序反应机理-需要NAD+或NADH+的脱氢酶的反应属于这种 B P E+A EA EAB EPQ EQ E+Q 2) 序列反应-随机机理： E+A←→EA B Q EP←→E+P EAB←→EPQ E+B←→EB A P EQ←→E+Q 3) 乒乓反应机理（转氨酶的反应属于这类型） ： A P B Q E E 两种不同模式的双底物反应 顺次式(sequential) 乒乓式(ping-pong) 双底物反应的米氏方程 当P1, P2 = 0 时 三、酶的抑制作用 没有引起酶的失活，但使酶的活性降低或丧失的现象，称为酶的抑制作用； 能够引起酶的抑制作用的化合物则称为抑制剂； 抑制剂对酶的抑制作用具有选择性； 酶的抑制剂一般具备两个方面的特点： 在化学结构上与底物分子状态相似 能够与酶的活性中心以非共价或共价的方式形成比较稳定的复合体或结合物。 根据酶活性变化可分为可逆与不可逆二类 不可逆抑制作用：抑制剂与酶反应中心的活性基团以共价形式结合，引起酶活的永久性失活。如有机磷毒剂二异丙基氟磷酸酯。（详见p373代表性抑制剂） 可逆抑制作用：抑制剂与酶蛋白以非共价方式结合，引起酶活性暂时性丧失。抑制剂可以通过透析等方法被除去，并且能部分或全部恢复酶的活性。 根椐可逆抑制剂与酶结合情况可分为竞争性抑制、非竞争性抑制与反竞争性抑制三类。 三、酶的抑制作用 3.1 竞争性抑制 抑制剂的化学结构与底物相似，因而能与底物竟争与酶活性中心结合。当抑制剂与活性中心结合后，底物被排斥在反应中心之外，其结果是酶促反应被抑制了。 竟争性抑制通常可以通过增大底物浓度，提高底物浓度可以降低抑制作用。 Vmax不变，Km变大，双倒数作图与正常直线相交于纵轴 = 竞争性米氏方程 米氏方程 α=1+[I]/Ki 3.2 非竞争性抑制 底物和抑制剂结构上没有共同之处，但酶可同时与底物及抑制剂结合形成三元复合物，但复合物不能进一步分解为产物。由于这类物质并不是与底物竞争与活性中心的结合，所以称为非竞争性抑制剂。 如某些金属离子（Cu2+、Ag+、Hg2+）以及EDTA等，通常能与酶分子的调控部位中的-SH基团作用，改变酶的空间构象，引起非竞争性抑制。 加入非竞争性抑制剂后，Km 虽然不变，Vmax减小 = 非竞争性米氏方程 米氏方程 3.3 反竞争性抑制 酶只有在与底物结合后，才能与抑制剂结合，引起酶活性下降。 反竞争性抑制可用下式表示： = 加入反竞争性抑制剂后，Km 、Vmax均减小，双倒数作图为一组平行线。 反竞争性米氏方程 米氏方程 I