实验四+圆二色光谱_CD_+2014.11.3试题.ppt

圆二色光谱（CD光谱） 一、预备知识 平面偏振光: 振动方向保持不变（只在一个平面上振动） 振幅发生周期性变化。 起偏器 电场矢量 传播方向 平面偏振光的产生: 自然光通过起偏器（偏振片或Nicol棱镜）。 一、预备知识 圆偏振光: 振幅保持不变，而方向周期性变化，电场矢量绕传播方向螺旋前进。 左右旋圆偏振光： 一束平面偏振光可以分解成两数振幅相同，频率相同，旋转方向相反的左、右旋圆偏振光。右旋是顺时针方向；左旋为逆时针方向。 旋转方向相反的 左、右圆偏振光 透过一光学 活性物质后 透过的左、右圆偏振光 振幅 相位 矢量和 相等 相同 平面偏振光 相等 不同 平面偏振光，方向改变 不等 相同 椭圆偏振光 不等 不同 椭圆偏振光，方向改变 光的叠加：一束自然光可以看作是两束相互垂直而没有相位关系的平面偏振光的加和。 一、预备知识 圆二色性： 如果旋光物质对特定波长的入射光有吸收，而且对左旋和右旋圆偏振光的吸收能力不同，那么在这种情况下，不仅左旋和右旋圆偏振光的传播速度不同，而且振幅也不同，于是，随着时间的推移，左右旋圆偏振光的合成光振动矢量的末端，将循着一个椭圆的轨迹移动。这就是说，由速度不同振幅也不同的作右旋圆偏振光叠加所产生的不再是线偏振光，而是椭圆偏振光，这种现象称为圆二色性。 二、基本原理 二、基本原理 圆二色性可用吸收率差和椭圆度来表示： 吸收(率)差 ：Δε = εL - εR ；ΔA = AL – AR 由于 Δε 绝对值很小，常用摩尔椭圆度 [θ]来代替，二者的关系是： 椭圆度θ，摩尔椭圆度[θ] θ=2.303(AL – AR)/4 [θ] = 3298(εL - εR)≈3300 (εL - εR) 入射光 透射光 旋光度 椭圆度 A：介质对圆偏振光的吸收 ε：介质对圆偏振光的摩尔消光系数， [θ] 单位：℃ · cm2/dmol 二、基本原理 当光学活性化合物对光没有特征吸收时，在谱图中仅为一条近似水平的直线。 当光学活性化合物对光存在特征吸收时，通常有两种情况： 当 εL εR 时，得到一个正性的圆二色光谱曲线； 当 εL εR 时，得到一个负性的圆二色光谱曲线。 光学活性物质：物质旋转偏振光振动平面的能力称为光学活性，而该物质被称为光学活性物质。 凡手性分子或者对映异构体的分子才具有光学活性，即可使偏振光的振动面发生旋转。 三、CD光谱的应用 意义： CD是一种特殊的吸收谱，它对手性分子的构象十分敏感； 许多有机物和络合物都具有手性，它们的对映异构体物理化学性质(熔点、沸点、旋光度、溶解度、分子式等)几乎完全相同，但它们的旋光方向相反，生理作用大不相同； 对于金属络合物在波长大于 300nm 的区域，包括可见区域，对 CD 的贡献来自含有金属离子的生色团，这一波段的 CD 谱对金属离子的氧化态、配位态及链－链相互作用均是敏感的。 生物基础分子一般都具有手性，也都具有光学活性。在对生物分子手性的研究中，发现了令人惊异至今不解的对称性破缺现象，那就是在自然界中，氨基酸有L型和D型两种对映异构体，天然糖也有L糖和D糖两种糖。但在生物体中，组成蛋白质的20种氨基酸，除最简单的甘氨酸不具有手性外，其余都是L型的，而生物体核酸中的糖环则都是D型的。生物体中这种对称性破缺现象是有特殊意义的自然现象。 三、CD光谱的应用 CD已成为研究分子构型和分子间相互作用的最重要的光谱实验之一； 蛋白质的圆二色性 (1)由氨基酸通过肽键连接而成； (2)光学活性基团：肽键（250nm以下的光谱区）、芳香氨基酸残基、二硫桥键（250~300nm光谱区）； (3)蛋白质有多个结构层次，相同的氨基酸序列，因蛋白质的折叠结构不同，基团的光学活性受到影响。 三、CD光谱的应用 苯丙氨酸（ phenylalanine， Phe）：255、261和268nm附近； 酪氨酸（ tyrosine， Tyr） ：277nm左右； 色氨酸（ tryptophan， Trp） ： 279、284和291nm附近； 二硫键的变化反映在整个近紫外区。 芳香氨基酸残基及二硫键处于不对称微环境时，在近紫外区表现出CD信号 例 1、100% α-螺旋 2、100% β-折叠 3、100%无规卷曲 多聚L-赖氨酸在不同构象条件下的标准CD光谱 蛋白质CD光谱分析——二级结构定性分析 例 —— chymotrypsin (all b) —— lysozyme (a + b) —— triosephosphate isomerase(a/b) —— myoglobin (all a) 蛋白质CD光谱分析——三级结构定性分析 例 蛋白质CD光谱分析——定量分析 假设蛋白质在波长λ处的CD信号是蛋