2009-0分子生物学实验指导.docVIP

生命科学系 2009-2010学年度分子生物学实验 （0601班） 周玉亭 2009-2010学年度分子生物学实验指导 实验一 大肠杆菌感受态细胞的制备 实验二 质粒DNA的转化 实验三 质粒DNA的提取 实验四 琼脂糖凝胶电泳检测DNA 实验五 PCR基因扩增））） 质粒DNA的转化 实验目的：掌握质粒DNA的转化技术 实验原理: DNA能够黏附于感受态细胞的表面，经过42℃短时间的热激处理 可以促进DNA的吸收。转化菌在非选择培养基中保温一段时间后，质粒DNA所携带的抗性基因（Ampr）） 实验三 质粒DNA的提取 一、实验目的：掌握碱裂解法提取质粒的技术和方法 二、实验原理??碱裂解法提取质粒利用的是环状质粒DNA与线状的染色体DNA片段在拓扑学上的差异来分离它们。在pH值介于12.0-12.5这个狭窄的范围内，线状的DNA双螺旋结构解开变性，在这样的条件下，共价闭环质粒DNA的氢键虽然断裂，但两条互补链彼此依然相互盘绕而紧密地结合在一起。当加入pH4.8的醋酸钾高盐缓冲液使pH降低后，共价闭合环状的质粒DNA的两条互补链迅速而准确地复性，而线状的染色体DNA的两条互补链彼此已完全分开，不能迅速而准确地复性，它们缠绕形成网状结构。通过离心，染色体DNA与不稳定的大分子RNA、蛋白质-SDS复合物等一起沉淀下来，而质