质粒DNA碱变法提取 分子生物学实验.docVIP

质粒DNA的碱变法提取、纯化和检测 史倩 201005140081 10级生命基地 同组者：阎珍珍、张姗 一、实验目的 1.利用碱变法从大肠杆菌DH5（E.coli DH5）中提取pUC19质粒 2.学习并掌握质粒DNA提取的原理、纯化和检测方法及琼脂糖凝胶电泳技术 二、实验原理 1.质粒概述: 质粒是染色体外能够进行自主复制的遗传单位，现在习惯上用来专指细菌、酵母菌和放线菌等生物中染色体以外的DNA分子。在基因工程中质粒常被用做基因的载体。目前，已发现有质粒的细菌有几百种，已知的绝大多数的细菌质粒都是闭合环状DNA分子(简称cccDNA)。细菌质粒的相对分子质量一般较小，约为细菌染色体的0.5%-3%,大小在1Kb-200Kb之间。 质粒由于分子小、便于分离和提取，在DNA重组中，质粒或经过改造后的质粒可通过连接外源基因构成重组体，携带目的基因进入细菌、动物细胞或植物体内进行扩增与表达，因此是基因工程中一种非常重要的载体，质粒特征的分析已被广泛用于细菌种属鉴定、耐药性、毒力及同源性分析。近年来由于基因芯片技术的出现，质粒基因探针的开发和应用也得到了飞速的发展，所以这就要求我们从宿主细胞中提取高质量的质粒DNA，质粒提取成为分子生物学实验室一项最基本的工作。 2. 质粒DNA的提取、纯化和检测： 提取和纯化质粒DNA的方法很多，目前常用的有：碱裂解法、煮沸法、羟基磷