核酸凝胶电泳.终解剖.pptVIP

二·聚丙烯酰胺凝胶电泳 聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺(简称Acr)和交联剂N，N’一亚甲基双丙烯酰胺(简称Bis)在催化剂过硫酸铵(AP)，N，N，N’，N’ 四甲基乙二胺(TEMED)作用下，聚合交联向成的具有网状立体结构的凝胶，并以此为支持物进行电泳。 聚丙烯酰胺凝胶电泳可根据不同分子所带电荷的差异及分子大小的不同所产生的不同迁移率将DNA或蛋白质分离成若干条区带，如果分离纯化的样品中只含有同一种DNA蛋白质，样品电泳后，就应只分离出一条区带。SDS是一种阴离子表面活性剂能打断蛋白质的氢键和疏水键，并按一定的比例和蛋白质分子结合成复合物，使蛋白质带负电荷的量远远超过其本身原有的电荷，掩盖了各种蛋白分子间天然的电荷差异。因此，各种蛋白质 SDS复合物在电泳时的迁移率，不再受原有电荷和分子形状的影响，只是棒长的函数。这种电泳方法称为SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(简称SDS—PAGE)。 聚丙烯酰胺凝胶电泳种类 1.变性聚丙烯酰胺凝胶（SDS） 变性聚丙烯酰胺凝胶是分子生物学常用技术之一，是根据寡核苷酸的大小来分离，因此可将全长产物与不完整的短分子分开。电泳时通常每一泳道至少加1mg合成的寡核苷酸，电泳后在紫外灯下定位寡核苷酸条带，将长度正确的寡核苷酸从凝胶上切下。主要用于单链DNA片段的分离或纯化。 用途；放射性DNA探针的分离，DNA测序