核酸分子杂交(生)解剖.ppt

内容提要 随机引物标记 DNA缺口平移标记 全程RNA探针标记 化学法全程标记 3′末端标记 5′末端标记 一、设计原理 一、设计原理 一、设计原理 （一）液相杂交 （二）固相杂交 （三）原位杂交 （四）基因芯片技术 1.菌落杂交 4.点杂交和狭缝杂交 1.何谓分子杂交?其原理是什么？杂交的影响因素有哪些？ 2.常见的分子杂交的种类有哪些，其应用什么? 3.何谓探针，标记方法有哪些？ Northern印迹与Southern 印迹的不同点 1、变性：RNA电泳前加热变性、电泳时加变性剂保 持RNA处于变性状态，DNA电泳前和电泳中不变性 2、转膜：RNA转膜前不需变性和中和处理,Southern 印迹时，DNA转膜前需进行碱变性及中和处理 3、靶核酸为RNA DNA样品点到滤膜上 1 变性 2 中和 3 固定DNA 4 与标记探针杂交 5 洗脱与显影 探针DNA 探针标记 变性 将探针加到固定的DNA上 1、斑点印迹为圆形 2、狭缝印迹为线状 3、鉴别DNA、RNA 4、简单、快速，同一张膜可检测多个样品 5、特异性不高、不能鉴别核酸分子