第10章多肽与蛋白质类药物.ppt

第十章多肽与蛋白质类药物 多肽与蛋白质类药物 第一节 多肽及蛋白质类药物的生产方法 第二节 多肽类药物 第三节 蛋白类药物 多肽与蛋白质类药物 第一节 多肽及蛋白质类药物的生产方法 1.蛋白质类药物的分离与纯化 2.多肽与蛋白质的化学合成 第二节 多肽类药物 第三节 蛋白类药物 多肽与蛋白质类药物 第一节 多肽及蛋白质类药物的生产方法 第二节 多肽类药物 1.概述 2.主要多肽类药物 3.主要多肽类药物制备 第三节 蛋白类药物 多肽与蛋白质类药物 第一节 多肽及蛋白质类药物的生产方法 第二节 多肽类药物 第三节 蛋白类药物 1.概述 2.主要蛋白质类药物的制备 蛋白质类药物的分离与纯化 （一）材料选择 （二）蛋白质提纯的一般方法 （三）蛋白质的分离和纯化 （四）溶液中蛋白质浓度的测定 （五）纯度检查 （一）材料选择 原料来源包括动物、植物及微生物等。选择原料时应考虑来源丰富、目的物含量高、成本低且易于提取的材料。 同时应考虑其种属、发育阶段、生物状态、来源、解剖部位、生物技术产品的宿主菌或细胞等因素的影响。 （二）蛋白质提纯的一般方法 1．根据蛋白质等电点的不同来纯化蛋白质。 2．根据蛋白质分子形状和大小不同来纯化蛋白质。 3．根据溶解度的不同来纯化蛋白质。 4．根据电离性质的不同来纯化蛋白质。 5．根据蛋白质功能专一性的不同来纯化蛋白质。 （二）蛋白质提纯的一般方法 （二）蛋白质提纯的一般方法 对蛋白质的离子交换层析，一般多用离子交换纤维和以葡聚糖凝胶、琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶等为骨架的离子交换剂，主要是取其具有较大的蛋白质吸附容量，较高的流速和分辨率等优点。 另外电泳法亦是利用电离性质的不同来分离纯化蛋白质。 （二）蛋白质提纯的一般方法 6．根据蛋白质疏水基团与相应的载体基团结合来纯化蛋白质。 7．根据蛋白质在溶剂系统中分配的不同来纯化蛋白质 8．根据蛋白质受物理、化学等作用因素的影响来纯化蛋白质。 9．根据蛋白质的选择性吸附性质来纯化蛋白质。 10．根据酶对蛋白质的作用来纯化蛋白质。 （三）蛋白质的分离和纯化 1．时间因素 在蛋白质分离和纯化过程中，共同的问题是蛋白质反应达到平衡所需要的时间，而且为避免蛋白质的变性、微生物的污染等，操作常在低温环境中进行。 通常在25℃时，化学反应的速率是低温5℃时的3-4倍。 2．选择离子交换层析条件的程序 （三）蛋白质的分离和纯化 3.蛋白质分离纯化的可能的技术手段的组合 （三）蛋白质的分离和纯化 分步分离纯化的可能步骤 （四）溶液中蛋白质浓度的测定 1. UV法 （1）280nm光吸收法 （2）280nm和260nm的吸收差法 （3）215nm和225nm的吸收差法 2. 双缩脲法 3. 福林－酚试剂法 4. 考马斯亮蓝G-250染色法 （五）纯度检查 确定protein 的纯度标准一般为： 分子大小是否均一，电荷是否均一，是否具有恒定的氨基酸组成，是否具有单一的N端和C端残基，能否结晶，进一步纯化时生物活性是否有所提高等。 （五）纯度检查 常用蛋白质纯度检查的方法有： 1．HPLC或FPLC（快速蛋白液相色谱 Fast protein liquid chromatography）， 2．电泳均一性 3．免疫化学法 4．生物测定法 （五）纯度检查 5．分光光度法 （1）UV法 （2）IR法 6．高速离心法 7．可结晶性 8．N端，C端的测定 9．恒定的氨基酸比 多肽类概述 由氨基酸缩合而成的化合物称为多肽，它们是通过一个氨基酸分子的-NH与另一分子氨基酸的-COOH脱去一分子水形成-CO-NH-键而相互连接起来的。 概述 一般将50或50个以下的氨基酸残基组成的化合物，列入多肽。多数无特定空间构象，某些多肽也有一定构象，但其构象的坚固性远不如蛋白质，其构象的浮动性很大。 多肽在生物体内的浓度很低，在血液中一般为 , 但它们的生理活性很强，在调节生理功能时起着非常重要的作用。 概述 活性多肽主要是从内分泌腺、组织器官、分泌细胞和体液中产生或获得的。 1953年人工合成了第一个有生物活性的多肽——催产素（OT）。 到了60、70年代神经肽的研究进入高潮。同时，由于很多脑活性肽也存在于胃肠道组织中，从而推动了胃肠道激素的研究. 到了70年代，生物技术的发展更开拓了多肽药物的新领域——细胞生长调节因子。现已发现的细胞生长调节因子已超过100种. 概述 许多活性蛋白质，多肽都是由无活性的蛋白