第11章 DNA合成yj.ppt

第三篇基因信息的传递 基因（gene） 基因是为蛋白质和RNA等生物活性分子编码的DNA序列 根据产物的类别分为蛋白质基因和RNA基因 根据产物的功能分为结构基因和调节基因 基因表达（gene expression） 通过转录和翻译，将DNA分子上A，G，C，T四个符号所包含的信息，转变为蛋白质分子上20种氨基酸的信息 第十一章DNA的生物合成 熟记DNA复制的特点 熟记参与原核和真核生物DNA复制的主要复制酶 了解参与DNA复制的各种因子及过程 掌握DNA修复的几种方式 掌握逆转录过程和意义 生物体内DNA合成的三个方面 复制(replication） 以DNA作为模板指导的DNA合成（遗传信息由亲代DNA传递到子代DNA分子的过程） 反转录 损伤DNA的修复 第一节 DNA复制（DNA Replication） 一 复制的特征 （一）半保留复制 DNA复制时，以亲代DNA解开的两条单链为模板，按照碱基配对原则各自合成一条与之互补的DNA子代单链，成为两个与亲代DNA完全相同的子代DNA分子，在子代DNA分子中一条链是新合成的，另一条是保留亲代的，故称半保留复制。 [实验证据] 1957年M.Meselson和F.W.Stahl以大肠杆菌为材料，在含15N和14N的NH4Cl中培养，证实了DNA的半保留复制方式 [意 义] 保持了代与代间DNA碱基序列上的一致性，从而保证了生物特性和类型的稳定性，遗传过程的保守性。但遗传变异普遍存在 （二）复制的原点、方向和方式 1.复制原点（origin of replication) DNA复制要从DNA分子的特定部位开始，此部位称复制原点 原核生物 仅一个，特殊的重复序列约245bp 真核生物 多个起始点(例：酵母17号染色体含400个) 2.复制叉式（θ复制） 复制时，亲代DNA开链，新链沿张开的模板生长，形成的 Y 形结构称为复制叉（replication fork） （三）半不连续复制（semidiscontinuous replication） 在DNA复制过程中，一条链连续合成，称为前导链（leading strand）；另一条链不连续合成，称为后随链（lagging strand)。故DNA复制呈半不连续复制 冈崎片段（Okazaki fragment）：后随链不连续合成的DNA子链片段。原核细胞长1000-2000 b，真核细胞长100-200b 二 DNA复制的酶学 原料：dATP、dTTP、dCTP、dGTP DNA模板 DNA聚合酶 RNA引物，蛋白因子，Mg2+ （一）复制的化学反应 在模板DNA碱基顺序指导下完成合成 在已有的RNA引物或DNA片段的3′-OH后接续进行，DNA单链聚合方向为5′→3′ dNTP的β、γ位两个高能磷酸键断裂，释放出能量和PPi，使5′-Pi与前面核苷酸的3′-OH反应，形成磷酸二酯键 （二） DNA聚合酶（DNA-dependent DNA polmerase，DNA pol） 1.大肠杆菌DNA聚合酶（3种） （1） DNA pol ? 5′?3′的聚合作用，合成20个核苷酸即离开模板 3′?5′外切酶活性 5′?3′外切酶活性 去除RNA引物，校正错误，修复损伤 （2） DNA polⅡ 只在缺DNA polⅠ、Ⅲ时起作用 5′?3′的聚合作用 3′?5′外切酶活性 体内功能不清楚 （3）DNA pol Ⅲ 结构 10种亚基共22个组成不对称二聚体 α、ε、θ亚基组成核心酶 β亚基结合模板并使酶沿模板滑动 τ亚基将核心酶与模板结合，有ATPase活性 功能 5′?3′的聚合作用（核心酶α亚基） 3′?5′外切酶活性（核心酶ε亚基） 5′?3′外切酶活性 复制中DNA链延长起主要作用，细菌中9000 dNTP/秒加入，校对作用，与pol ?配合错误率降至10-11 2.真核生物DNA pol 特性与大肠杆菌相似，已发现五种 α：延长随从链 β：无其它DNA pol 时起作用 γ：线粒体DNA pol δ：延长前导链 ε：校正错误，修复损伤（Pol I） 3. DNA复制的保真性 遵守严格的碱基配对规律 聚合酶对碱基的选择功能 （DNA pol Ⅲε亚基） 聚合酶对错误碱基的即时校读作用（proofread） （三）复制中解链与DNA分子的拓扑学变化 DNA分子的解旋、解链及解链DNA的保护 1.拓扑异构酶(topoisomerase) DNA复制时松弛超螺旋，以利复制叉的行进及DNA合成，合成后再使其恢复成超螺旋。分两型 （1）拓扑异构酶I（Topo I） 切开双链环状DNA的一条链松弛超螺旋后再连接DNA。不需ATP 环状单链DNA打结与解结 环状双链DNA的合成 环状双链DNA环连与解环