基因克隆载体解剖.ppt

第三章 基因克隆载体(质粒载体) 载体 (P39) 概念：携带外源DNA进入宿主细胞，并为其提供复制和功能基因表达调控系统的工具。 功能 1.运送外源基因高效转入受体细胞2.为外源基因提供复制能力或整合能力3.为外源基因的扩增或表达提供条件 载体在基因工程中的必要性 目的外源DNA很难进入受体细胞 目的外源DNA一般不带复制子系统 目的外源DNA一般不具备表达的调控系统 载体应具备的条件（P38） 1. 具有针对受体细胞的亲缘性或亲和性（可转移性） 2. 具有与特定受体细胞相适应的复制位点或整合位点 3. 具有多种单一的酶切位点（多克隆位点）4. 具有合适的选择性标记 自我复制表达，外源基因的插入不影响其功能的发挥，易于从宿主细胞分离出来 5. 分子量尽可能小，以提高其载装能力 目的基因能否有效导入受体，并在其中高效表达，很大程度上取决于所用的载体。 质粒的基本生物学特征 生物细胞内固有的、能独立于寄主染色体而自主复制、并稳定遗传的一类核酸分子 常见于原核细菌和真菌中 绝大多数的是DNA型（除了酵母的杀伤质粒（killer plasmid）是一种RNA质粒外） 绝大多数具有共价、封闭、环状的分子结构，即cccDNA 分子量范围：1－300kb，多数在10kb 某些蓝藻、真菌和绿藻中也有发现 质粒的存在形式： 开环DNA分子(oc