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Northern Blot 湖南师范大学生命科学学院 刘如石 博士/副教授 一、实验目的： 1、掌握Northern blot的实验原理与操作技 术； 2、了解Northern blot的实验在分子生物学 与转基因领域的应用。 二、实验原理： 在变性条件下将待检的RNA样品进行琼脂糖凝胶电泳，然后将分离的RNA转移到尼龙膜，然后用放射性标记的探针进行杂交检测，最后进行放射性自显影。用途：检测样品中是否含有基因的转录产物（mRNA）及其含量。 三、实验材料 1、仪器 恒温水浴箱，电泳仪，凝胶成像系统，真空转移仪，真空泵，UV 交联仪，杂交炉，恒温摇床，脱色摇床，漩涡振荡器，分光光度计，微量移液器，电炉（或微波炉），离心管，烧杯，量筒，三角瓶等。 2、材料总RNA样品或mRNA样品，探针模板DNA(25 ng)，尼龙膜 3、试剂NorthernMax Kit（Cat. # 1940，Ambion, Inc.），琼脂糖，DEPC, X光底片，底片暗盒，Random Primer， dNTP Mixture，111 TBq/mmol [a-32P] dCTP，Exo-free Klenow Fragment和10 X Buffer, Sephadex G-50,SDS，双氧水, 灭菌水等。 四、实验步骤 1. 用具的