动物生物化实验讲义.docVIP

实 验 讲 义 （霍金龙老师） 实验一 实验基本知识与基本操作，血液样品的处理及组织匀浆的制备 实验二 考马斯亮蓝法测定蛋白质含量 实验三 琥珀酸脱氢酶的作用及其竞争性抑制的观察 实验四 血液葡萄糖的测定（福林—吴宪氏法） 实验五 核酸的定量测定（紫外吸收法） 实验六 全血基因组DNA的提取（离心柱型试剂盒提取法） 实验七 PCR扩增基因 实验八 琼脂糖凝胶电泳 实验九 凝胶层析法分离血红蛋白和胰岛素 实验十 生物化学实验技术理论讲授 核酸蛋白层析分离系统实验工作流程 准备工作 1，核酸蛋白检测仪（紫外检测仪） 1台 2，色谱采集器 1套 3，自动部分收集器 1台 4，恒 流 泵 1台 5, 层 析 柱 1支 6，溶液容器和试剂样品 开机调试 核酸蛋白检测仪应提前开机半小时预热，然后按仪器使用说明书来调整仪器的透光度，灵敏度，使其稳定在：“100”或“0”上。 设定自动部分收集器收集样品的所需时间。 设定恒流泵的所需流量。 进行实验前的洗脱工作 等仪器都设置完成，检测仪工作稳定后，进行样品池实验冲洗，并调整透过率（T100%）和灵敏度A在0.5上检测仪显示读数为“0”（基线）。 数据采集及计算分析 把样品加入层析柱进行实验，并连接电脑（或记录仪），打开信号采集器，打开电脑上装入电脑层析的应用软件，并进行记录保存。然后再对实验所记录的数据进行分析和计算。 以上为一个完整的实验操作过程 实验一 实验基本知识与操作 一.目的 1.熟悉实验室规则及常用生化仪器。 2.掌握各种仪器的正规操作。 3.清点洗刷实验用具。 二．实验内容 （一）常用生化仪器 量器：量筒、容量瓶、吸量管、离心管、微量取液器 玻璃仪器 容器：烧杯、试管、锥形瓶、滴管 仪器：离心机、水浴箱、电泳仪、分光光度计等 （二）玻璃仪器的洗涤 1、初用的玻璃仪器的清洗：表面附有碱性物质，先用去污粉洗，再用自来水冲洗干净，然后浸于盐酸溶液浸泡过夜，再用自来水反复冲洗干净，最后用蒸馏水冲洗1－2次，80℃烤干备用。 2、使用过的玻璃仪器洗涤 （1）一般非计量玻璃仪器或粗容量仪器，如烧杯、试管、量筒等先用肥皂水刷洗，再用自来水冲洗干净，最后用蒸馏水冲洗1－2次，洗净之器皿倒置干净处晾干或烘箱烤干（量筒不可烘烤）。 （2）量器，如吸管、滴定管、容量瓶等先用自来水冲洗，直至不挂水珠，再用蒸馏水冲洗1－2次，风干备用。若冲洗后仍挂水珠，则将其晾干后浸于铬酸洗液浸泡数小时。然后用自来水反复冲洗干净，再用蒸馏水冲洗1－2次，除吸管可烘干外，其它只能倒置晾干。 3、操作：每个人按上述方法刷洗5支试管及烧杯、锥形瓶各1-2个。洗净后请教师检查。 （三）吸量管和微量移液器的使用 1.吸量管的使用（注意标签、选择容量大小合适的吸量管） （1）正确拿法 中指和拇指拿住吸管上端，食指顶住吸量管顶端 （2）取液 用橡皮球吸液体至刻度上，眼睛看着液面上升；吸完后用食指顶住吸量管上端。 （3）调刻度 吸量管与地面保持垂直，下口与试剂瓶接触，并成一角度；用食指控制液体下降至最上一刻度处；液体凹面、刻度和视线应在一水平面上。 （4）放液 吸量管移入准备接受溶液的容器中，仍使其出口尖端接触器壁，并成一角度，吸量管仍保持垂直。放开食指，使液体自动流出。奥氏吸量管和刻度到底的吸量管应吹出尖端残留的液体。移液管应最后靠壁15秒。 2.微量移液器的使用 调节体积选取钮至所需值，套上吸头，旋紧。垂直持握移液器，用大拇指按下液体吸放钮至第1档，将吸头插入待吸溶液，松开大拇指使吸放钮回复原位。将移液器移入准备接受液体的仪器，用大拇指再次按下液体吸放钮，至第1档后继续至第2档以排空液体。 3.练习吸量管的使用 取50ml锥形瓶加入未知酸5ml ,酚酞指示剂1滴，摇匀，用0.01mol/LNaOH滴定，记录结果。（无色酚酞遇酸不变色，遇碱变红。）滴定时边滴边摇动锥形瓶。 (四) 试剂配制： 1、溶液浓度表示法 （1）重量浓度：有时候溶液的浓度以单位体积溶液中所含溶质的重量来表示。现在规定容量的单位是升（L），所以浓度表示为克/升（g/L）、毫克/升（mg/L）、微克/升（(g/L）等。 （2）百分浓度：过去习惯用百分含量来表示浓度，但其含意很不清楚，如2％的醋酸可以解释为： 每100g溶液中有2g醋酸（W/W）， 每100ml溶液中有2g醋酸（W/V〕， 每100ml溶液中有2ml醋酸（V/V）。 （3）摩尔（