生物技术之层析技术分解.pptVIP

* 1.吸附层析概念 指混合物随流动相通过吸附剂时，由于吸附剂对不同物质的吸附力不同，从而使混合物分离的方法。 吸附层析就是以吸附剂为固定相，根据待分离组分与吸附剂之间的物理或化学吸附力差别而达到分离目的的层析技术。 优点：容易保持组分活性，操作简单 缺点：吸附容量小，选择性差，无机吸附剂性能不稳定 * 物理作用的范德华吸附：无选择性，吸附速度快，吸附的过程是可逆的。 化学吸附：由原子价力的作用引起。有选择性，吸附速度较慢，不易解吸。 吸附层析概念 * 2.吸附层析基本原理 由于吸附剂的吸附能力可受溶剂影响而发生改变，样品中物质被吸附剂吸附后，用适当的洗脱液冲洗，改变吸附剂的吸附能力，使之解吸，随洗脱液向下移动。当解吸下来的物质向下移动时，又遇到前面新的吸附剂又重新被吸附。此被吸附的物质再被后来的洗脱液洗脱下来而使其下移动。经如此反复的吸附—解吸—再吸附—再解吸的过程，物质可沿着洗脱液的前进方向移动，经过一段时间以后，该物质会向下移动一定距离。 吸附层析基本原理 此距离的长短与吸附剂对该物质的吸附力以及溶剂对该物质的解吸(溶解)能力有关。 不同的物质由于吸附力和解吸力不同，移动速度也不同。吸附力弱而解吸力强的物质，移动速度就较快。所以在洗脱过程中各组分便会由于移动速率不同而逐渐分离出来，这就是吸附层析的基本过程。 吸附层析基本原理 根据操作方式不同 3.吸附层析分类 柱层析（column chromatography） 薄层层析（thin layer chromatography） 吸附层析 ?薄层层析(Thin layer chromatography) 　　薄层层析是以涂布于玻璃板或塑料膜等载体上的基质为固定相，使之形成均匀的薄层，以液体为流动相的一种层析方法。 层析板 展开剂 薄层色谱 ?薄层层析(Thin layer chromatography) 其方法是把吸附剂均一地铺在一块玻璃板或塑料膜上形成薄层，待分离的样品点在薄层一端，在密闭容器中用适宜的溶剂（展开剂）展开，由于吸附剂对不同物质吸附力大小不同，因此当溶剂流过时，不同物质在吸附剂和溶剂之间发生连续不断地吸附、解吸附、再吸附、再解吸附，易被吸附的物质相对移动的较慢，较难吸附的物质则相对地移动得快一些。经过一段时间的展开，不同的物质就被彼此分开，最后形成互相分离的斑点。 戊糖（木糖）：黄绿 已糖（果糖、葡萄糖）：棕红、灰绿 二糖（蔗糖）：兰褐 三糖 薄层层析的优点： 1.展层时间短，薄层层析分离混合物一般仅需15-60min； 2.设备简单，操作方便，既适用于分析，也适用于制备； 3.灵敏度高，可检出微量物质。 4.分离能力强，斑点集中。 经过适当的时间以后，不同的物质各自形成区带，如果被分离的是有色物质的话，就可以清楚地看到色带(色层)。 如果被吸附的物质没有颜色，可用适当的显色剂（喷雾显色）或紫外光观察定位。 4. 吸附层析显色 5. 吸附层析的应用 氨基酸、肽、糖类、脂类、苷（皂苷）类物质的分离、鉴定 纯净水、医药用水的制备 药液脱色 分配系数：当一种溶质分布在两个互不相溶的溶剂中时，它在流动相和固定相两相内的浓度之比是个常数，称为分配系数。 K（分配系数）= 分配系数与温度、溶质和溶剂的性质有关，当两相做相对运动时，不同组分可得到分离。 (五）分配层析（partition chromatography） 利用混合物在两种或两种以上的不同溶剂中的分配系数不同而使物质分离的方法，叫分配层析。 1.概念 凝胶层析 不同大小的分子流过多孔凝胶→→分子大的组分先流出，分子小的组分后流出→→各组分便按分子从大到小的顺序依次流出 2.凝胶层析的介质 凝胶是一种多孔网状结构物质。层析用的凝胶一般都呈球形，颗粒的大小通常以目数来表示。层析的分辨率和流速与凝胶颗粒大小有关。颗粒大，流速快，但分离效果差；颗粒小，分离效果较好，但流速慢。一般常用的是100~200目。 目前常用的有交联葡聚糖凝胶，交联琼脂糖凝胶，丙烯酰胺凝胶，聚丙烯酰胺葡聚糖凝胶以及Superdex。 * 是最传统的凝胶介质。 由天然高分子葡聚糖与其它交联剂(3-氯-1,2环氧丙烷)交联而成的凝胶。国外商品名为Sephadex。 主要由Pharmacia Biotech生产。常见的有三类： ——Sephadex G系列、Sephacryl S 系列和Sephadex LH系列。 （1）葡聚糖凝胶： 结构： 基本骨架：葡聚糖（dextran） 交联剂：3-氯代-1,2-环氧氯丙烷使葡聚糖之间通过醚键交联聚合而成的三维空间网状结构。 葡聚糖凝胶： 凝胶型号与交联度、吸水量的关系： 交联度：如Sephadex G25, G50, G100,数字越小，交联度越大，凝胶网状结构