生物药物与检验第三章免疫法教程分析.ppt

* 沉淀线靠近抗原孔，提示抗体含量高；靠近抗体孔，提示抗原含量高。出现多条沉淀线，则说明抗原和抗体都不是单一成分。沉淀线弯向分子量大的一边，如相等，则为直线。抗体多为IgG，分子量约150000，据此可粗略估计未知抗原的分子量。两种受检抗原的性质可完全相同，部分相同或完全不同。 * 表7-3 SM-EDA-GA包被法中链霉素包被质量浓度对ELISA实验误差的影响 包被质量浓度（mg/ml） ELISA测定结果（A492±SD）（n=4） 4 1.098±0.0628 1* 1.011±0.0302 0.5 0.969±0.0876 0.25 0.792±0.1023 3、酶-底物反应时间的选择 抗原与抗体、抗体与酶标抗体反应一般在37℃反应2～3h达到高峰。 时间太短，敏感性下降，时间太长，吸附的抗原或复合物（在这个温度下）可能脱落。 酶-底物反应时间一般采用15min、30min或45min，也可以标准阳性血清为准，随时测定其OD值，当达到规定的OD值时，即终止反应。 四、ELISA的定量计算与灵敏度 1、ELISA的定量计算 一般采用分光光度计测定结合物中的酶量和抗体蛋白（IgG）量，酶量和IgG计算方法如下。 其中，0.4表示酶的A403nm值为1时，酶量为0.4mg/ml；0.42表示酶的A403nm值为1时，其相应A280nm值为0.42；0.62表示在A280n