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现代生物学实验（三）— 微生物与免疫学实验教案 课程名称: 微生物与免疫学实验 英文名称: Microbiology and Immunology Laboratory 课程编号: 110026 课程学时：108学时 课程学分：3.0学分 教师姓名: 郑忠辉 张连茹 邬小兵 前导课程：微生物学（理论课） 教学方式: 实验及技术理论讲授 考试方式: 平时考核＋笔试＋实验操作考试 一、教学目标和要求 微生物学与免疫学实验是生物学重要的基础课之一。本课程的目的是使学生掌握和了解微生物学与免疫学的主要研究方法与技术，巩固和加深基础理论知识，提高分析、解决问题的能力和开拓创新能力，培养学生严肃、严密、严格、求实的科学态度，为从事微生物学与免疫学的研究和应用打下基础。 要求学生要做好实验课前的预习，明确每次实验的目的与基本步骤。在实验中要有严紧的科学态度，对实验过程中出现的现象和问题，要仔细思考和分析；认真做好每次实验的实验数据记录及处理工作。 二、主要实验内容 土壤细菌的分离及总数测定 微生物的形态观察与鉴定 消毒与灭菌效果的测定 海洋放线菌抗菌活性菌株的筛选 酵母胞外多糖的发酵及其测定 经典血清学反应 巨噬细胞的收集和观察 免疫标记技术 三、主要教学方法 以学生动手实验为主，结合课堂讲授、示范操作及多媒体教学。 四、使用教材及主要参考书 使用教材： 1、林加涵等主编. 现代生物学实验（下册）. 北京：高等教育出版社，2001. 2、编补充讲义 主要参考书： 1、赵斌，何绍江主编. 微生物学实验. 北京：科学出版社，2002. 2、沈萍等主编. 微生物学实验. 第三版. 北京：高等教育出版社，1999 3、柳忠辉等主编.免疫学常用实验技术.北京：科学出版社，2002年 五、实验项目 模 块1：土壤细菌的分离及总数测定 1、培养基的配制与灭菌 2、土壤细菌的分离与纯化 3、土壤中细菌总数的测定 模 块2：微生物的形态观察与鉴定 1、细菌的革兰氏染色 2、细菌的芽孢染色 3、大分子物质的水解试验 4、糖发酵试验 5、甲基红试验 6、伏-普试验 7、柠檬酸盐试验 8、细菌的快速鉴定（细菌自动鉴定系统 BBL CRYSTAL） 9、霉菌的形态观察与鉴定 模 块3：消毒与灭菌效果的测定 1、中和剂的选择 2、化学消毒剂杀菌效果的定量测定 模 块4：海洋放线菌的分离及抗菌活性菌株的筛选 1、放线菌的选择分离与计数 2、放线菌形态的观察 3、双层琼脂扩散法筛选抗菌活性菌株 模 块5：酵母胞外多糖的发酵及其测定 1、酵母胞外多糖的液体发酵 2、酵母子囊孢子的观察 3、酵母胞外多糖的提取与测定 模 块6：经典血清学反应 1、单向琼脂扩散试验 2、双向琼脂扩散试验 3、免疫电泳 4、间接凝集反应测定人血清类风湿因子 模 块7：小鼠腹腔巨噬细胞的收集和观察 1、小鼠的处死和固定 2、巨噬细胞的收集，沉淀和制片 3、巨噬细胞的形态观察 模 块8：免疫标记技术 1、血清抗体的纯化 2、辣根过氧化物酶标记抗体（过碘酸盐法） 3、双抗体夹心法测定人血清中IgG抗体含量 模 块1：土壤细菌的分离及总数测定 教学要求 掌握配制培养基的一般方法和步骤。 了解各种灭菌方法的基本原理及应用范围，掌握实验室高压蒸汽灭菌及干热灭菌的操作方法。 了解微生物分离和纯化方法，掌握纯培养分离技术、无菌操作技术。 了解各种微生物数量测定方法的基本原理及应用范围，掌握平板菌落计数的操作方法。 教学学时 18学时 讲授的内容 微生物培养基的分类、用途、配制方法。 各种灭菌方法的基本原理、应用范围、操作方法及注意事项。 纯培养分离技术、无菌操作技术。 各种微生物数量测定方法的基本原理及应用范围，平板菌落计数法的操作步骤和注意事项。 实验项目 1、培养基的配制与灭菌 2、土壤细菌的分离与纯化 3、土壤中细菌总数的测定 应学习的技术和方法 培养基制作和灭菌技术、无菌操作技术、纯培养分离技术、微生物的接种技术、微生物数量的测定方法。 应学习的仪器使用方法 高压蒸汽灭菌锅，干燥箱，培养箱。 教学的重点和难点 重点：实验原理，相关方法、技术的介绍，分离微生物的关键技术，主要操作环节。 难点：无菌操作、倒平板等不易掌握的实验操作技能技巧 难点的解决办法 详细深入讲解，观看录像，示范操作，细心现场指导。 模 块2：微生物的形态观察与鉴定 教学要求 掌握细菌染色观察技术及观察霉菌形态的基本方法，进一步巩固显微镜的使用方法。 了解有关的微生物常规与快速鉴定方法与技术，掌握常用的一些基于微生物生理生化反应的鉴定方法及原理，初步掌握 BBL Crystal鉴定系统的操作方法。 教学学时 24学时 讲授的内容 微生物的制片及各种染色技术，革兰染色和芽孢染色的原理、操作步骤及注意事项。 常用的微生物常规