【预习】放免方法设计剖析.pptVIP

添加剂 目的：改善试剂的稳定性/特殊需要 要求：对特异性结合无影响 常见添加剂 EDTA-Na2 ANS BSA/明胶 抑肽酶 叠氮钠/硫柳汞 反应体积 抗原抗体反应∝反应物浓度 减小反应体积，利于提高反应浓度，提高实验灵敏度 体积过小，易出现加样误差，形成放射性复合物的量亦减少，测量误差增加 常规选用反应体积为：0.3ml-1.2ml 温育条件 反应的平衡常数与温度相关 严格控制反应温度，包括整个分析至离心过程 测定指标不同，其对温度的依赖程度亦不同 温度与反应速度相关 提高反应温度，可加速反应，但亲和力下降 4℃抗体亲和力最大，但反应时间较长 目前多采用较短时间37℃或室温孵育 样品处理 样品中可能存在各种干扰物质，或影响特异性反应的物质。故许多分析系统需要对分析样品进行预处理，常用的预处理方法是稀释或提取。 反应方式的选择 反应方式 平衡法 顺序饱和法 即时法 反应方式 平衡法 Ab Ag Ag* 加入 分离剂 Ag* Ab Ag* 方法学评价 稳定、重复性好、剂量反应曲线具有竞争性分析的典型特征，灵敏度相对较低 反应方式 顺序饱和法(非平衡竞争体系) Ab Ag 平 衡 Ag* Ab Ag* Ag Ag* Ab 终止 反应 方法学评价 灵敏度较高，但因第二次孵育时间较短，要求标记抗原的比活性较高，并且要求分离方法更为精细。