质粒DNA提取、酶切及检测.pptVIP

一、实验目的　　 通过本实验学习琼脂糖凝胶电泳检测DNA的方法和技术。 二、实验原理 核酸pH8左右时，碱基几乎不解离，整个分子带负电。 相同碱基数量的双链DNA几乎具有等量的净负电荷，能以同样的速度向正极方向移动。不同分子量的DNA片段泳动速度不一样，可进行分离。可以近似用于估算分子的大小。 可以分离相对分子质量相同，但构型不同的DNA分子。 　共价闭环超螺旋DNA（cccDNA）＞直线DNA（LDNA，2条链发生断裂）＞开环的双链环状DNA（ocDNA，1条链发生断裂）。 三、实验操作步骤 琼脂糖凝胶的制备 凝胶板的制备 加样 电泳 结果观察 　 将0.08g琼脂糖溶解在100 ml的1×TBE电泳液中,配制成0.8%琼脂糖凝胶溶液 当琼脂糖溶液的温度降至60℃～80℃时，加入GoldView I使其终浓度约为0.1μl/ml,混匀后，迅速倾入预先安装好的凝胶板中。 待其凝固后，小心取下梳齿，备用。 加样至样品孔中电泳,调至恒压80v，使DNA向阳性方向移动。当溴酚蓝移动到距离胶板下沿约1～2cm处，停止电泳。 紫外灯下观察电泳结果并进行拍照。 Relaxed circle Linearized form Super-coiled form 四、实验结果与讨论 根据观察结果，绘图。 分析自提质粒的情况以及酶切情况。 　　质粒DNA的提取、酶切及检测