7-感染的病原学检查重点解析.pptVIP

第7章 细菌与病毒的病原学检查法 标本的采集与运送 无菌操作，尽量避免杂菌污染。 不同时期采取不同标本。尽可能采集病变明显部位的材料。 早期采集，用抗菌药物前。 标本必须新鲜，采集后尽快送检。 特异性IgG抗体检测，取双份血清。效价增高4倍或以上有意义。 采取适当的保存方式。（冷藏、保温、保湿、甘油缓冲液等等） 标记：做好标记，详细填写化验单，保证无误。 第一节 细菌感染的微生物检查法  实验室诊断：细菌学诊断（细菌分离鉴定） 检测病原菌成分（抗原、核酸） 血清抗体检测 Diagnosis Strategy for Bacterial Infection 一、细菌学诊断 1.形态学检查 染色法 革兰染色法：最常用的染色方法。 抗酸染色法：鉴别分枝杆菌属细菌的重要方法。 荧光染色法：敏感性强。 特殊染色法： 鞭毛 芽孢 荚膜 异染颗粒 病原菌的分离培养 菌落 大小 形态 颜色 表面性状 边缘 透明度 溶血性 生化试验 Sugar Fermentation H2S Test Citrate utilization 血清学鉴定 用已知抗体检测未知抗原。 细菌毒素检测 Elek 平板试验：白喉外毒素检测。 鲎试验：内毒素检测。 动物实验 动物： 小鼠、大鼠、豚鼠、兔子、猴子 接种途径： 皮内、皮下、腹腔、静脉、脑内等。 动物试验目的 疑难病例标本的病原菌分离及研究 检测细菌毒力及致病性 半数致死量, LD50 半数感染量, ID50 建立感染动物模型 制备免疫血清 采集鸡红细胞 动物病原体分离鉴定 （1）解剖试验动物 接种后观察与解剖 试验组 对照组 皮肤出现脱毛 药物敏感试验 K-B法 二、检测病原菌成分 抗原检测：凝集试验、对流免疫电泳、ELISA 核酸检测：核酸杂交、PCR、16SrRNA 凝集实验 PCR 生物芯片 三、抗体的检测 血清学诊断：用已知抗原检测未知抗体。 方法：凝集试验、沉淀试验、补体结合试验、中和试验、间接免疫荧光试验、ELISA。 第二节 病毒感染的微生物学检查法 Diagnosis Strategy for Viral Infection 一、形态学检查 电子显微镜：形态典型的病毒 光学显微镜：观察包涵体 辅助诊断 二、病毒的分离培养与鉴定 动物接种 鸡胚培养 组织培养 1.原代细胞培养 2.二倍体细胞培养 3.传代细胞培养 Cytopathic Effect, CPE Fermentation of Sugars Monosacchrides: Sugar, Glucose, maltose, galactose Disacchrides: Lactose Tricarboxylic cylce (Oxidation cycle, or Krebs cycle) H2S Test Hydrogen sulfide Elek Plate 又称Elek平板毒力试验 方法：在含马血清、蛋白胨的平板上，将待检菌和阳性对照产毒菌平行接种到平板上，然后垂直放置一条含浸有白、喉抗毒素的滤纸片，培养24－48小时，如果产外毒素，在纸条和菌落间形成白色沉淀 Corynebacterium Corynebacterium diphtheriae, C. diphtheriae Diphterotoxin Diphtheria Fermentation of Sugars Monosacchrides: Sugar, Glucose, maltose, galactose Disacchrides: Lactose Tricarboxylic cylce (Oxidation cycle, or Krebs cycle) H2S Test Hydrogen sulfide Elek Plate 又称Elek平板毒力试验 方法：在含马血清、蛋白胨的平板上，将待检菌和阳性对照产毒菌平行接种到平板上，然后垂直放置一条含浸有白、喉抗毒素的滤纸片，培养24－48小时，如果产外毒素，在纸条和菌落间形成白色沉淀 Corynebacterium Corynebacterium diphtheriae, C. diphtheriae Diphterotoxin Diphtheria