实验微波辅助提取高效液相色谱法测定蔬果中的Vc含量新.pptVIP

b. 光电二极管阵列检测器 紫外检测器的重要进展 光电二极管阵列检测器：1024个二极管阵列，各检测特定波长，计算机快速处理，三维立体谱图。 c. 示差折光检测器 除紫外检测器之外应用最多的检测器； 可连续检测参比池和样品池中流动相之间的折光指数差值。差值与浓度呈正比； 通用型检测器（每种物质具有不同折光指数） 灵敏度低、对温度敏感、不能用于梯度洗脱 偏转式、反射式和干涉型三种 二、HPLC使用与基本维护 a) 色谱柱 是液相色谱分析的核心组件； 根据分析对象的性质选取合适的色谱柱，如正相色谱柱、反相色谱柱、离子交换色谱柱等； 正相色谱：流动相极性小于固定相极性，极性小的先流出，适于极性组分分离；如硅胶柱、羟基、氰基等。 反相色谱：流动相极性大于固定相极性，极性大的先流出，适于非极性组分分离；如烷基键合硅胶柱C8、C18等。 1-----方法建立 正相色谱 低极性流动相 反相色谱 高极性流动相 中等极性流动相 中等极性流动相 时间 时间 时间 时间 待测物极性：ABC 正、反相色谱中极性和保留时间的关系 正相色谱和反相色谱出峰顺序相反 时间，min 固定相：C1 固定相：C8 固定相：C18 硅胶-烷基键合相中烷基链长对反相色谱分离的影响 1-尿嘧啶；2-苯酚；3-乙酰苯；4-硝基苯；5-苯甲酸甲酯；6-甲苯 可见：反相键合色谱中，键合相碳链越长，分离效果越好。 b) 流动相 按流动相组成分：单组分和多组分； 按极性分：极性、弱极性、非极性； 按使用方式分：固定组成淋洗和梯度淋洗。 常用溶剂： 己烷、四氯化碳、甲苯、乙酸乙酯、乙醇、乙腈、水。 采用二元或多元组合溶剂作为流动相可以灵活调节流动相的极性或增加选择性，以改进分离或调整出峰时间。 * * 主讲教师：肖 小 华 实验学时：6 学时 实验名称：微波辅助提取-高效液相色谱法测定蔬果中的维生素C含量 实验目的、内容及要求 高效液相色谱简介 HPLC的使用与维护 High Performance Liquid Chromatography 一、高效液相色谱法 历史回顾； 基本原理与概念； HPLC定性与定量方法； HPLC仪器组成。 一、历史回顾 色谱法早在1903年由俄国植物学家茨维特分离植物色素时采用； 40年代，TLC，纸色谱，柱层析； 50年代，GC出现使色谱具备分离和在线分析功能； 60年代末 HPLC出现，使色谱分析范围进一步扩大； 1．新型固定相和检测器 2．联用仪器：GC-MS，HPLC-MS 3．智能化发展 1937-1972年，35年中有12个Nobel奖是与色谱研究相关的！ 固定相——CaCO3颗粒 流动相——石油醚 色带 色谱（Chromatography）一词来源于希腊语中 “chroma”=color; “graphein”=write 二、基本原理 当流动相中携带的混合物流经固定相时，与固定相发生相互作用。由于混合物中各组分在性质和结构上的差异，与固定相之间产生的作用力的大小、强弱不同，随着流动相的移动，混合物在两相间经过反复多次的分配平衡，各组分被固定相保留的时间不同，从而按一定次序由固定相中流出。 与适当的柱后检测方法结合，实现混合物中各组分的分离与检测； 两相及两相的相对运动构成了色谱法的基础。 色谱法分类 1．按两相分子的聚集状态分： 气体 固体 气-固色谱 气体 液体 气-液色谱 气相色谱 液相色谱 液体 固体 液-固色谱 液体 液体 液-液色谱 2．按固定相的固定方式分： 平面色谱 纸色谱 薄层色谱 高分子薄膜色谱 柱色谱 填充柱色谱 毛细管柱色谱 3．按分离机制分： 分配色谱：利用分配系数的不同 吸附色谱：利用物理吸附性能的差异 离子交换色谱：利用离子交换原理 空间排阻色谱：利用排阻作用力的不同 优点：“三高”、“一快”、“一广” 缺点： 高选择性——可将性质相似的组分分开 高效能——反复多次利用组分性质的差异 产生很好分离效果 高灵敏度——10-11-10-13 g，适于痕量分析 分析速度快——1 min-1 hr;一次可以测多种样品 应用范围广——气体，液体、固体物质化学衍生化再色谱分离、分析 对未知物分析的定性专属性差 需要与其他分析方法联用(GC-MS,