6基因工程基本原理(阅读).pptVIP

cDNA文库 载体 目的基因 * 平端连接 * 基因重组和基因工程 Genetic recombination and Genetic Engineering 一个完整的基因克隆过程包括以下步骤： 1。获得待克隆的DNA片段（基因）； 2。目的基因与载体在体外连接； 3。重组DNA分子导入宿主细胞； 4。筛选、鉴定阳性重组子； 5。重组子的扩增与／或表达。 （基因工程技术中常用的为II类酶） EcoR I Hind III 11111111111111111111111111111111111111111111111111111111111111 * 限制性核酸内切酶的作用特点 1、识别位点的DNA序列呈二重旋转对称（即具有迥文结构）； 2、切割DNA均产生含5’-磷酸和3’-羟基的末端； 3、错位切割产生具有5’-或3’-突出的粘性末端；而沿对称轴切割双链DNA产生平头末端，也称钝性末端。 4、少数不同的限制酶可识别和切割相同的位点，这些酶称为同切酶或同功异源酶。 5、有些限制酶识别序列不同，但切割DNA产生相同粘性末端，称同尾酶。 存在于细菌染色体外的小的共价、闭环双链DNA分子。 粘粒（柯斯质粒）是指含有λ噬菌体粘性末端的杂种质粒，由λDNA的COS区(约20-数百bp)与质粒重组而成，在宿主细胞中可作为正常噬菌体进行复制，但不表达任何噬菌