南医生化实验报告5课题.doc

生物化学实验报告 一、实验目的 1.学习并使用盐析法进行蛋白质的初步分离纯化； 2.学习并使用凝胶层析法对盐析分离的蛋白质溶液进行脱盐； 3.学习并使用离子交换层析法对脱盐的蛋白质进行纯化； 4.学习并使用醋酸纤维素薄膜电泳法对血清蛋白进行纯度鉴定。 二、实验原理 1.盐析法初步提取血清蛋白 蛋白质在水溶液中的溶解度是由蛋白质周围亲水基团与水形成水化膜的程度，以及蛋白质分子带有电荷的情况决定的，以上这两个因素中任何一个受到破坏，都会降低胶体的稳定性，即是蛋白质分子发生聚集进而沉淀出来。由于血清中蛋白质的颗粒大小、所带电荷和亲水程度不同，所以盐析所需的盐浓度也不一样。因此，利用不同浓度的硫酸铵溶液分段盐析，便可将血清中清蛋白和球蛋白从溶液中沉淀出来。 凝胶层析法对盐析分离的蛋白质溶液进行脱盐 用盐析法初布分离得到的蛋白质中含有大量的中性盐，会妨碍蛋白质进一步地纯化，所以必须先将其中的中性盐去除。本实验采用的是凝胶层析法，利用的是蛋白质与无机盐类之间分子量的差异。当溶液通过SephadeG-25凝胶柱时，分子直径小的无机盐会进入凝胶颗粒的网孔中，而分子直径大的蛋白质不会进入其中。因此在洗脱过程中，大分子的蛋白质会先于小分子的中性盐被洗脱出来，从而达到脱盐的目的。 离子交换层析法对脱盐的蛋白质进行纯化 离子交换是指溶液中的离子和交换剂上的离子进行可逆的交换。带正电荷的