纤维素的微生物的分离课题.doc

专题二 课题3：分解纤维素的微生物的分离 一、基础知识 ㈠ 纤维素与纤维素酶 1.纤维素 （1）单位： 。 （2）形成方式： ，要脱下 。 （3）本质：一种由 首尾相连而成的高分子化合物，是含量最丰富的多糖类物质。 （4）存在：植物的根、茎、叶等器官都含有大量的纤维素。其中 是自然界中纤维素含量最高的天然产物。 （5）含量：纤维素是地球上含量最丰富的多糖类物质，植物每年产生的纤维素超过70亿吨，其中 能被土壤中能产生纤维素酶的微生物所利用，不会大量积累。 （6）作用：组成细胞壁，作植物的骨架。 2.纤维素酶 纤维素酶是一种 ，一般认为它至少包括 组分，即 (外切酶)、 (内切酶)和 ，前两种酶使纤维素分解成纤维 ，第三种酶将纤维二糖分解成 。 思考1：草食性动物是怎样消化食物中纤维素的？ 答：肠胃中的 微生物。能产生纤维素酶而分解纤维素。 纤维素酶的作用对照实验 试管 甲 乙 滤纸条 1cm x 6cm 1cm x 6cm 缓冲液 10ml 11ml 纤维素酶 / 1ml 振动 1h 1h 现象 分解 不分解 思考2：乙试管的滤纸条为什么会消失？ 答：本实验的自变量是纤维素酶的有无，自变量的操作方法是：在一支试管中添加适量（1mL）的纤维素酶溶液，在另一支试管不添加纤维素酶，但需加入等量的缓冲液，不能加入蒸馏水，否则会影响溶液的pH。 （二）纤维素分解菌的筛选 1、刚果红染色法 （1）刚果红（ ）能的作用 是一种 ，与纤维素形成 复合物，而不与水解后的纤维二糖和葡萄糖发生这种反应。 染色原理 当在含有纤维素的培养基中加入刚果红时，刚果红能与培养基中的纤维素形成 。当纤维素被纤维素酶分解后，刚果红--纤维素的复合物就无法形成，培养基中就会出现以纤维素分解菌为中心的 ，可通过是否产生透明圈来筛选 。 例3：纤维素分解菌的筛选方法？透明圈越大，纤维素分解菌越多？ 答： 。 二、实验设计 思考4：本实验的流程与课题2中的实验流程有哪些异同？ 答：课题2是将土样成的菌悬液直接涂布在以尿素为 氮源的选择性培养基上，直接分离得到菌落。 本课题通过选择培养，使纤维素分解菌得到增殖后，再将菌液涂布在选择培养基上。其他步骤基本一致。 1、土壤取样 ① 分布环境：富含 的环境中。 原因：在富含纤维素的环境中纤维素分解菌的含量相对提高 ②实例：树林中多年落叶形成的腐殖土，多年积累的枯枝败叶等 思考5：为什么要在富含纤维素的环境中寻找纤维素分解菌？ 答：生物与环境的互相依存关系，在富含纤维素的环境中纤维素分解菌的含量相对提高，因此从这种土壤中获得目的微生物的几率要高于普通环境 思考6：如果找不到合适的环境，可以将滤纸埋在土壤中，将滤纸埋在土壤中有什么作用？你认为滤纸应该埋在土壤中多深？ 答：将滤纸埋在土壤中能使纤维素分解菌相对集中，实际上是人工设置纤维素分解菌生存的适宜环境。一般应将滤纸埋于深约 cm左右的土壤中， 天后可用。 2、选择培养 ① 目的： ，确保从样品中分离所需微生物 培养基组成 提供主要的营养物质 纤维素粉 5g 碳源（能源） NaNO3 1g 氮源、无机盐 KCl 0.5g Na2HPO4·7H2O 1.2g KH2PO4 0.9g MgSO4 ·7H2O 0.5g 无机盐 酵母膏 0.5g 生长因子、碳源、氮源 水解酵素 0.5g 氮素、生长因子 溶解后，蒸馏水定容至1000mL 水 ② 制备选择培养基 思考7：旁栏中的配方是液体培养基还是固体培养基？为什么？ 答：是 培养基，原因是配方中无 。 思考8：这个培养基对微生物是否具有选择作用？如果具有，是如何进行选择的？ 答：有 作用，本配方中纤维素作为主要碳源，只有能分