2-4湖塘水体叶绿素a测定.docVIP

湖塘水体叶绿素a测定 姓 名： 学 号： 班 级： 组 别： 指导教师： 实验概述 【实验目的及要求】 （1）初步了解叶绿素a测定的原理和常规测定方法 （2）通过实验，掌握叶绿素a的测定方法及富营养化水样的前处理方法 （3）熟练掌握抽滤装置及分光光度计的使用。 浮游植物的主要光合色素是叶绿素(Chlorophyll)，常见的有叶绿素a、b和c.叶绿素a（chl-a）存在于所有的浮游植物中，大约占有机物干重的1-2%是估算浮游植物生物量的重要指标，因此浮游植物叶绿素a含量的测定成为浮游植物生物量的重要指标而被广泛应用。 浮游植物叶绿素a的测定方法有许多种，根据所使用的仪器可以分为高效液相色谱法（HPLC法）、荧光光度计法和分光光度计法等。高效液相色谱法能够很精确地测定各种光合色素的含量但由于仪器昂贵分析操作步骤繁琐一般不能用于野外大量样品的快速分析。荧光光度计也能够精确地测定叶绿素a的含量特别是能够测定叶绿素a含量较低的样品，但由于分析过程中容易受其他色素或色素衍生物的干扰，也不利于快速分析各类不同的野外样品。因此，分光光度计法成为最常用的浮游植物叶绿素a含量的测定方法。 在所有分光光度计法中根据所用的色素萃取液分为了丙酮法、甲醇法和乙醇等，再根据比色所用的波长，又分为单色法和多色法（例如单色丙酮法和四色丙酮法）等。主要的细胞破碎法有研磨、低温冻融、超声破碎等。尽管丙酮现在仍广泛用于实际分析中，但由于丙酮的萃取效率比较差，特别是对蓝藻的叶绿素a的萃取效率比较低，使得甲醇和乙醇成为替代丙酮的色素萃取剂。不过甲醇对人体毒害性大，且在酸化过程中容易产生误差，于是，乙醇成为现在广泛应用的叶绿素a的萃取剂。超声破碎法因快速、提取效率高等特点也被研究者所青睐。 本实验介绍一种以热乙醇为萃取溶剂，结合超声细胞破碎法为基础的叶绿素a含量测定方法。 叶绿体内类囊体薄膜上的色素，可以分为两类：一类具有吸收和传递光能的作用，包括绝大多数的叶绿素a，以及全部的叶绿素b、胡萝卜素和叶黄素；另一类是少数处于特殊状态的叶绿素a，这种叶绿素a不仅能够吸收光能，还能使光能转换成电能。在光的照射下，具有吸收和传递光能作用的色素，将吸收的光能传递给少数处于特殊状态的叶绿素a，使这些叶绿素a被激发而失去电子(e)。脱离叶绿素a的电子，经过一系列的传递，最后传递给一种带正电荷的有机物——NADP+(中文简称是辅酶)。失去电子的叶绿素a变成一种强氧化剂，能够从水分子中夺取电子，使水分子氧化生成氧分子和氢离子(H+)，叶绿素a由于获得电子而恢复稳态。这样，在光的照射下，少数处于特殊状态的叶绿素a，连续不断地丢失电子和获得电子，从而形成电子流，使光能转换成电能。 根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收，利用分光光度计最大吸收波长下的吸光值，进行浊度校正 0.007 47.916 1号管（加酸） 0.061 0.006 2号管 0.157 0.018 156.986 2号管（加酸） 0.102 0.016 数据处理： 1号试管：校正后665nm的吸光度 0.08-0.007=0.073 校正（加酸）后665nm的吸光度 0.061-0.006=0.055 叶绿素a=(29.62*（0.073-0.055）*10)/(0.1*1)=53.316mg/m3 2号试管：校正后665nm的吸光度 0.157-0.018=0.139 校正（加酸）后665nm的吸光度 0.102-0.016=0.086 叶绿素a=(29.62*（0.139-0.086）*10)/(0.1*1)=159.986mg/m3 数据分析： 2号管数据远大于1号管数据，原因可能是因为两次过滤用的滤膜的孔径不一样。1号管采用的滤膜孔径比较大，导致叶绿素通过滤膜小孔流失，使测量的时候叶绿素含量很低。2号管采用的滤膜孔径比较小，叶绿素流失较少，实验测得叶绿素也比较多。 【结论】 由表中数据可知，测得的叶绿素a，说明，查阅资料，根据所得的叶绿素a的含量，判断所测水样的富营养化程度，并说明依据。水体富营养化一般采用的指标是: 氮含量超 过0.2～ 0.3 mg/L , 磷含量大于0.01～ 0.02 mg/L ,BOD 大于10 mg/L , pH 值7～ 9 的淡 水中细菌总数超过10 万个/毫升, 叶绿素a 含量大于10 ug/L 。由实验数据可知，水样的叶绿素a含量分别为mg/m3和mg/m3，经判断水体为，则为营养状态（2）试对热乙醇-超声法的优缺点加以分析。优