HBVcccDNA检测及其的临床应用.doc

HBV cccDNA检测的临床慢性乙型肝炎病毒感染者血清HBV cccDNA检测的临床意义外周血淋巴细胞中乙肝病毒cccDNA检测研究目的做外周血淋巴细胞中乙肝病毒cccDNA检测研究,并探讨其临床意义。方法采用淋巴细胞分离液分离外周血淋巴细胞,用荧光定量PCR法检测外周血淋巴细胞中cccDNA含量。结果36例CAH患者中检出29例阳性(80.56%),61例CPH患者中检出32例阳性(52.46%),59例ASC标本中检出1例阳性(0.02%)。47例健康人标本检测结果均为阴性。CAH组、CPH组、携带者及阴性对照组之间互相存在统计学差异(P0.05),携带者组和阴性对照组之间无统计学差异。对定量资料的统计学分析显示:CAH组检测的基因拷贝数较CPH组基因拷贝数明显增高,两者具有统计学差异(P0.05)。结论(1)cccDNA在外周血淋巴细胞中的存在,对于慢性乙肝病毒持续感染状态的建立和维持,可能具有重要意义。(2)检测外周血淋巴细胞乙肝病毒cccDNA存在及其含量高低,可以作为评估临床抗乙肝病毒治疗有效性的一个参考指标。(3)该检测还可用于乙肝患者治疗中的复发及预后判断。1． DNA提取 1.1 外周血淋巴细胞 应用淋巴细胞分离液(或红细胞裂解液)，分离外周血淋巴细胞，沉淀加入核酸提取液B50μl充分混匀（提取液用前需室温溶解并充分混匀），后100℃裂解10分钟，然后13,000rpm离心3分钟，，取上清液4μl做PCR反应。 日检乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA的研究现状及进展测方法及其研究意义日检测方法目前, 乙型病毒性肝炎(乙肝) 是一种不能被治愈的疾病。乙型肝炎病毒(HBV) 共价闭合环状DNA ( cccDNA) 是HBV前基因组复制的原始模板, 是导致HBV持续感染的关键因素。本文参考近几年的临床与动物实验结果, 就HBV cccDNA的研究现状及进展做一综述。 　　【关键词】　肝炎病毒, 乙型; 共价闭合环状DNA; 肝炎, 慢性 【中图分类号】R 512162　【文献标识码】A　【文章编号】1007 – 9572 Progress in Research of Hepa titis B Virus Cova lently Closed C ircular DNA　L IU Yan - jin, FENG L i - ying. Departm ent of Gastroenterology, Second Hospital of Hebei M edical University, Hebei Key Laboratory of Gastroenterology, Hebei Institute of Gastroenterology, Shijiazhuang 050000, China 　　【Abstract】　HepatitisB is an incurable disease at p resent. Hepatitis B virus (HBV) covalently closed circular DNA ( cccDNA) , an original temp late of HBV p re - genome rep lication, is a key factor leading to hepatitis B persistent infection. This article reviews the research status of HBV cccDNA and its advancement. 　　【Key word】　HepatitisB virus; Covalently closed circularDNA; Hepatitis, chronic 　目前尚无特效药能够治愈慢性乙型病毒性肝炎(乙肝) , 乙肝的治愈主要是根 除乙型肝炎病毒(HBV) 前基因组RNA复制的原始模版———共价闭合环状DNA( covalently closed circular DNA, cccDNA) 。研究cccDNA 对HBV 的复制以及感染状态的建立, 对于乙肝的治愈具有重要意义[ 1 ] 。本文就cccDNA的研究现状及进展做一综述。 1　HBV cccDNA的合成和作用 HBV基因组是部分双链的环状DNA分子( relaxed circular DNA, rcDNA) 。病毒侵入宿主肝细胞后, 脱去外壳蛋白,rcDNA进入肝细胞核中, 在宿主DNA 聚 合酶的作用下, 形成超螺旋结构的cccDNA。cccDNA在宿主肝细胞核内积聚, 形 成cccDNA 池( cccDNA pool) 。以HBVcccDNA为模板, 利用RNA 多聚酶II转录成前基因组mRNA ( 315 kb) 和其他