J抗狂犬病血清效价测定法.docVIP

附录Ⅺ J抗狂犬病血清效价测定法 第一法 小鼠中和试验法（仲裁法） 本法系根据抗狂犬病血清能中和狂犬病病毒的作用，将供试品与标准品做系列稀释，分别与狂犬病病毒悬液结合，小鼠脑内注射，在规定时间内观察小鼠存活和死亡情况，以测定供试品效价。 试剂（1）量取0.9%磷酸二氢钾溶液75ml、2.4%磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O）溶液425ml、8.5%氯化钠溶液500ml，混合后加水至5000ml，调pH值至7.2～8.0。于磷酸盐缓冲液98ml中，加入2ml灭能小牛血清，临用前配制。 （2）20％小牛血清磷酸盐缓冲液 称取磷酸二氢钾1.2g、磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O)20.8g，加注射用水溶解并稀释至1000ml，溶解后过滤，调pH至7.6。灭菌后pH值应为7.2～8.0。于磷酸盐缓冲液80ml中，加入20ml灭能小牛血清，临用前配制。 中和用病毒悬液的制备 （1）病毒悬液的制备 取CVS毒种(一般为冻干毒种)制成10-2悬液，制法见本法（2）项，脑内接种体重10～12g小鼠每只0.03ml，待发病后取鼠脑再制成10-2悬液，接种于小鼠脑内进行传代，一般传2～3代。选用第5天发病并麻痹的鼠脑以脱脂牛乳研磨稀释成20%的脑悬液，按0.5ml分装安瓿,冻干后真空封口，制成冻干中和用病毒，-30℃冻存待用；或用第5天发病并麻痹的鼠脑用20%小牛血清磷酸盐