小鼠骨髓染色体制片技术精编.pptVIP

湖州师范学院 生命科学学院生物系 一、实验目的 1、了解动物细胞染色体制片的原理； 2、学习小鼠骨髓细胞染色体的制片方法； 3、观察小鼠细胞染色体的数目和形态。 二、实验原理 ※制备染色体标本是细胞遗传学最基本的技术，优良的染色体制片是进行染色体显带、组型分析、原位杂交等的先决条件。 ※染色体的制备在原则上可以从所有发生有丝分裂的组织和细胞悬浮液中得到。最常用的途径是从骨髓细胞、血淋巴细胞和组织培养的细胞中制备染色体。 二、实验原理 ※小型动物的染色体制片最好最有效的材料就是骨髓组织。 ※骨髓细胞中，有丝分裂指数相当高，因此可以直接得到中期细胞而不必象淋巴细胞或其它组织那样要经过体外培养。 ※对大型动物通常采用对骼骨、脊或胸骨穿刺术吸取红骨髓，小型动物多采用剥离术取股骨以获得骨髓细胞。 三、实验材料 小白鼠（2n=40） 五、实验步骤 1、前处理 为提高有丝分裂的指 数，增多细胞中期分 裂相。提前3-4小时 向小鼠腹腔内注射0.02 —0.04%秋水仙碱溶液。 每10g体重注入0.1ml 五、实验步骤 7、固定：弃上清，沿管壁加5～8ml固定液（甲醇：冰醋酸=3：1），吹散打匀，37℃静置20min。用吸管对细胞悬液再次吹打均匀（水浴中），继续37℃静置20min。 8、离心： 1000r/min离心10min。 9、制细胞悬浮液：弃上清，留约0.1～0