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第三节 酶促反应动力学 研究的是酶促反应速度及其影响因素的关系。 酶促反应速度：用单位时间内底物的消耗量或产物的生成量表示 研究酶促反应动力学要采用初速度 初速度：反应速度与时间呈正比的阶段。 反应10min. 或底物消耗在5% 影响因素： 底物浓度（[S]） 酶浓度（[E]） 温度 pH 抑制剂和激活剂等 一、底物浓度对反应速度的影响 在其他因素不变的情况下，底物浓度对反应速度作图呈矩形双曲线。 （一）米-曼氏方程式 中间产物学说： 米-曼氏方程式： Km为米氏常数。 当[S]Km时，v∝[S]; 当[S]Km时，v≈Vmax （二）Km与Vmax的意义 Km值等于酶促反应速度为最大速度一半时的底物浓度。 1 V＝ Vm 时 2 Km＝［S］ Km 10-6-10-2mol 2. K3 K2 Km值可用来表示酶与底物的亲和力。Km值愈大，亲和力愈小。 Km 值愈小，亲和力愈大。 Km值是酶的特征性常数之一。只与酶的结构、酶所催化的底物和反应环境有关，而与酶浓度无关。 4. Vmax是酶完全被饱和时的反应速度，与酶浓度呈正比。 如果酶的总浓度已知，可从Vmax计算酶的转换数（K3）。 酶的转换数定义：当酶被底物充分饱和时，单位时间内每个酶分子（或活性中心）催化底物转变为产物的分子数。 （三）Km值和Vmax值的测定 双倒数方程式： 双倒数做图法： 用于测Km值和Vmax值 用于判断可逆性抑制反应的性质 二、酶浓度对反应速度的影响 当[S][E]时， [E]与v呈正比 关系。 三、温度对反应速度的影响 双重影响 最适温度：酶促反应速度最快时的环境温度。 体内大多数酶的最适温度在35～40℃之间。 最适温度不是酶的特征性常数。 低温不使酶破坏。 四、pH对反应速度的影响 pH影响酶与底物的亲和力。 最适pH：酶催化活性最大时的环境pH。 体内多数酶的最适pH接近中性，少数例外。 最适pH不是酶的特征性常数。 测定酶活性时，应选用适宜的缓冲液，以保持酶的活性。 五、抑制剂对反应速度的影响 凡能使酶的活性下降，又不引起酶变性的物质统称为酶的抑制剂 (inhibitor)。分为： （一）不可逆抑制作用（irreversible inhibition) （二）可逆抑制作用(reversible inhibition) （一）不可逆抑制作用 概念：抑制剂通常以共价键与酶活性中心上的必需基团相结合，使酶失活，不能用透析、超滤等方法予以除去。 羟基酶抑制剂 有机磷化合物对胆碱酯酶的抑制，为专一性抑制剂。 用解磷定解除抑制。 胆碱酯酶 乙酰胆碱 胆碱＋乙酸 乙酰胆碱堆积引起付交感兴奋症状：恶心，呕吐，，多汗，肌肉震颤，瞳孔缩小 2. 巯基酶抑制剂 重金属离子及砷，为非专一性抑制剂。 可用二巯基丙醇（BAL）解毒。 （二）可逆抑制作用 概念：抑制剂与酶非共价键可逆结合，使酶活性降低，可用透析、超滤等方法将抑制剂除去而使酶活性恢复。分为： 竞争性抑制作用 (competitive inhibition) 非竞争性抑制作用 (non-competitive inhibition) 反竞争性抑制作用 (uncompetitive inhibition) 1. 竞争性抑制作用 概念：抑制剂与酶的底物结构相似，可与底物竞争酶的活性中心，从而阻碍酶与底物结合形成中间产物，而抑制酶的活性。 竞争性抑制的双倒数方程： 特点： ① 竞争性抑制剂与底物结构相似; ② 增加[S]可减弱抑制作用; ③ 酶的Vmax不变，而Km值增大。 1. 竞争性抑制作用 举例： ①丙二酸对琥珀酸脱氢酶的抑制 举例： ②磺胺药对细菌FH2合成酶的抑制 举例： ③抗代谢物的抗癌作用 如氨甲蝶呤、5-氟尿嘧啶、6-巯基嘌呤等。 2. 非竞争性抑制作用 概念：抑制剂与酶活性中心外的必需基团结合，底物与抑制剂之间无竞争关系。 酶促反应动力学特点：Vmax降低，Km不变。 非竞争性抑制的双倒数方程： 3. 反竞争性抑制作用 抑制剂仅与酶和底物形成的中间产物(ES)结合，使ES的量下降。这样，既减少从ES转化为产物的量，也同时减少从ES解离出游离酶和底物的量。 特点：Vmax和Km均降低。 反竞争性抑制的双倒数方程： 六、激活剂对反应速度的影响 概念：使酶由无活性变为有活性或使酶 活性增加的物质称为酶的激活剂 (activator)。 酶的激