Experiment10.临床标本的病原生物检测-2答题.ppt

临床标本的病原生物检测-2 临床标本的病原生物检测-2 总结与复习-2 课程内容 临床标本的病原生物检测-1 总结与复习-1 临床标本的病原生物检测-2 总结与复习-2 临床标本的病原生物检测-3 总结与复习-3 本次课程进度安排 时间：180min 讲解示教：肥达试验（30min） 操作：临床标本的病原生物检测-2（30min） 细菌的鉴定（病原学方法）-2 生长特性鉴定：动力试验（病案5、7、8） 菌体形态鉴定：脑脊液沉淀革兰染色镜检（病案10） 生化反应鉴定：甘露醇发酵试验结果判定（病案6、9） 双糖铁试验结果判定（病案5、7、8） 转种尿素、枸橼酸盐、蛋白胨培养基（病案5、7、8） 血清反应鉴定：玻片凝集试验（病案7、8）、肥达试验（病案7） 耐药性鉴定：纸片法药敏试验（病案5、6、7、8、9） 真菌的鉴定（形态学方法）-2 菌体形态鉴定：真菌小培养结果镜检假菌丝（病案13） 寄生虫的鉴定（形态学方法） 患者大便标本饱和盐水浮聚法镜检钩虫卵（病案 1 ） 患者大便标本直接涂片法镜检日本血吸虫卵（病案 3 ） 患者外周血液标本涂片染色镜检恶性疟原虫（病案 4 ） 总结与复习-2（120min） 镜下玻片标本观察与鉴定 生长现象、生化反应、免疫试验的结果判定（包括双扩、试管凝集） 肥达试验 反应类型：试管凝集试验 原理：用已知抗原（4种）与不同稀释度（1:20~1:1280）的患者血清反应，检测待检血清中是否含有相应抗体及抗体的多少。 O：伤寒沙门菌O抗原（菌体抗原） H：伤寒沙门菌H抗原（鞭毛抗原） PA：甲型（A型）副伤寒沙门菌H抗原 PB：乙型（B型）副伤寒沙门菌H抗 步骤： 1、准备待检血清（1:10稀释），32支小试管置于试管架，标记。 2、连续对倍稀释法制备不同稀释度的待检血清试管8支×4组。 3、加入已知抗原（每组各加一种），振摇试管架，混匀。 4、37℃反应16~24h。 5、观察记录试验结果，判断4种抗体效价（抗原凝集效价）。 6、根据抗体效价，判断临床意义。 肥达反应判断临床意义 1、伤寒流行区的健康人因隐性感染或预防接种，其血清中可能有低效价抗体存在。一般当伤寒O凝集效价≥1:80，H≥1:160，副伤寒H≥1:80时，才有诊断意义。 2、抗O正常，抗H正常，感染伤寒的可能性很小。 3、抗O正常，抗H超过正常，可能是接种了伤寒菌疫苗，无诊断意义。 4、抗O超过正常，抗H正常，可能是伤寒感染早期，且不能区别伤寒或副伤寒。 ①抗O抗体主要是IgM，出现较早；抗H抗体主要是IgG，出现较晚。 ②无论伤寒或甲型乙型副伤寒病人，血清中抗O抗体效价均升高，故抗Ｏ抗体效价增高时，只能拟诊为伤寒类感染，而不能区别伤寒或副伤寒。 5、抗O超过正常，抗H超过正常，可诊断为伤寒或副伤寒中的某一种或几种感染。 伤寒杆菌与副伤寒杆菌甲、乙、丙4种的H抗原各不相同，所产生的Ｈ抗体各异。当某种抗Ｈ抗体超过正常时，结合抗O效价升高，则可做出诊断。 6、肥达反应必须动态观察，每周检查一次，如效价显著递升，诊断意义更大。 7、约有10%的伤寒病人始终不出现肥达阳性反应，有的是由于在发病早期已大量应用过氯霉素，有的是由于应用了免疫抑制剂，有的可能是轻型感染，个别人可能由于先天性体液免疫功能缺陷，或老弱、婴儿免疫功能低下所致。 肥达反应结果判定 主要参考文献： 《病原生物与免疫实验学》第2版，科学出版社 《人体寄生虫学》第7版，人民卫生出版社 《医学微生物学》第7版，人民卫生出版社 《医学免疫学》第5版，人民卫生出版社 sosoyjw * 川北医学院·病原生物与免疫实验学教学课件 sosoyjw 上次 课程 内容 本次 课程 内容 下次 课程 内容 课程内容 进度安排 8 管0.5ml生理盐水NS： 抗原 抗原 抗原 抗原 抗原 抗原 抗原 抗原 每管加入0.5ml抗原： 血清稀释度： 1:20 1:40 1:80 1:160 1:320 1:640 1:1280 NS 8 管0.5ml不同稀释度抗体： 1:10 0.5ml稀释待检血清： 1:40 1:20 1:80 1:160 1:320 1:640 1:1280 弃去 最终血清稀释度： 1:40 1:80 1:160 1:320 1:640 1:1280 1:2560 对照 8 管1ml抗原抗体混合物： 连续 对倍 稀释 1 2 3 4 5 6 7 8 1 2 3 4 5 6 7 8 抗O 抗H 甲型抗H 乙型抗H 1：