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第三节　色谱法原理（Basic Principles of 　　Chromatography） 塔板理论的假设： 1. 在柱内一小段高度内组分分配瞬间达平衡（H→理论塔板高度） 2．载气非连续而是间歇式（脉动式）进入色谱柱，每次进气一个塔板体积 3．样品和载气均加在第0号塔板上，且忽略样品沿柱方向的纵向扩散 4．分配系数在各塔板上是常数 0123 2. 色谱峰的正态分布 在气相色谱中，塔板数n是很大的，此时流出曲线可趋近于正态分布曲线，这样流出曲线C与时间t 的关系可由下式表示： t = tR 时，C = Cmax 解释了色谱流出曲线的形状和 浓度极大值对应的t 理论塔板数与色谱参数之间的关系为： 成功处： 解释了色谱流出曲线的形状和浓度极大值对应的tR 阐明了保留值与K的关系 评价柱效（n，σ） 二、速率理论1956年荷兰学者van Deemter等在研究气液色谱时，提出了色谱过程动力学理论——速率理论。以后Giddings等人有进一步加以补充完善。 1.范.弟姆特Van Deemter方程式H = A + B/u + C·uH：理论塔板高度，u：流动相流速减小A、B、C三项可提高柱效A、B、C三项各与哪些因素有关？固定相颗粒越小（dp↓) 填充的越均匀（ λ ↓ ）A↓，H↓，柱效n↑。 表现在涡流扩散所引起的色谱峰变宽现象减轻，色谱峰较窄。 (1) 存在着浓度差，产生纵向扩散; (2) 扩散导致色谱峰变宽，H↑(n↓)，分离变差; (3) 分子扩散项与流速有关，流速↓，滞留时间↑，扩散↑; (4) 扩散系数：Dg ∝(M载气) ； M载气↑，B值↓。 (5) 弯曲因子ν:与填充物有关，由于固定相颗粒的存在，使分子不能自由扩散，从而使扩散程度降低。填充柱色谱，ν1 使用低粘度的固定液，固定液的涂层应薄，且均匀 (3) 速率理论为色谱分离和操作条件的选择提供了理论指导。阐明了流速和柱温对柱效及分离的影响。 (4) 各种因素相互制约，如载气流速增大，分子扩散项的影响减小，使柱效提高，但同时传质阻力项的影响增大，又使柱效下降；柱温升高，有利于传质，但又加剧了分子扩散的影响，选择最佳条件，才能使柱效达到最高。 H - u曲线与最佳流速：由于流速对这两项完全相反的作用，流速对柱效的总影响使得存在着一个最佳流速值，即速率方程式中塔板高度对流速的一阶导数有一极小值。 两个组分怎样才算达到完全分离？ 首先 两组分的色谱峰之间的距离必须相差足够大 其次 峰必须窄 降低板高、提高柱效的方法是： 1）采用粒度较小、均匀填充的固定相（A项↓ ） 2）分配色谱应控制固定液液膜厚度（C项↓ ） 3）适宜的操作条件： 流动相的性质和流速，柱温等等（B项↓ ） 选用分子量较大、线速度较小的载气——N2气， 控制较低的柱温 增大柱选择性是改善分离度的最有力手段 气相色谱中，柱选择性取决于固定相性质和柱温 选择合适的固定相使与不同组分的作用产生差别才能实现分离 一般说，降低柱温可以增大柱的选择性 分析题1 当下述参数改变时：①柱长缩短，②固定相改变，③流动相流速增加，④相比减少，是否会引起分配系数的变化？为什么？ 分析题2 当下述参数改变时：①柱长增加，②固定相改变，③流动相流速减少，④相比增大，是否会引起分配比的变化？为什么？ 计算题1 在3.0m色谱柱上，分离组分X和Y的色谱图如下，计算X和Y组分的有效塔板数为多少？ 在一根2m长的硅油柱上，分析一个混合物，得下列数据：苯、甲苯及乙苯的保留时间分别为1′20″、2′2″及3′1″；半峰宽为0.211cm，0.291cm及0.409cm，已知记录纸速为1200mm.H-1,求色谱柱对每种组分的理论塔板数及塔板高度。 2. 分离度（分辨率）及影响因素 分离度：相临两组分间峰顶间距离是峰底宽平均值的几倍 讨论：R≥1.5 作为相邻两峰已完全分开的标志 令W2=W1=Wb，且假设相邻两组分的n一致（n有效(1)=n有效(2)），则可导出下式： 注： r21=α， 柱效项 柱选择性项 柱容量项 k 影响峰位 n 影响峰宽窄 α影响两峰间距 a．柱效项及其影响因素：影响色谱峰的宽窄 增加柱效是提高分离度的一个直接有效手段 提高柱效、改善分离的途径：增加柱长；降低板高 b．柱选择项及其影响因素：影响色谱峰的间距 c．柱容量项及其影响因素：影响色谱峰位 综合考虑分离度、分离时间和峰检测几项因素控制k的最佳范围 1~10，改变柱温和改变相比可使k值改变 3.练习：如何根据具体情况改进分离度？ 计算题 2 * * r21=α 一、色谱分离的基本理论——塔板理论 1.塔板理论的要点 将色谱分离过程比拟作蒸馏过程，将连续的色谱分离过程分割成