氨基酸分离双层析法.pptVIP

实验一 氨基酸分离与鉴定 ——双向层析法 目的要求 实验原理 注意要点 1. 原文只用一张滤纸，在原点处点样（混合氨 记酸）后，溶剂先沿Y轴方向自下而上展开（“走第一相”）；此后，滤纸旋转90度，再沿X轴方向自下而上展开以使混合氨基酸被完全拉开而分离（“走第二相”）。我们增加两张滤纸（B只“走第一相”和C只“走第二相”）分别作为A走第一相和走第二相的对照。在B和C的X轴和Y轴上依此点上1~8号单个氨记酸。 1. His 2.Asp 3.Ser 4. Ala 5. Pro 6. Val 7. Phe 8. Leu 2. 依据“相似相溶”的原理，极性大（和带电荷）的AA在水相中溶解度较大，而非极性大的AA在有机相中溶解度较大。 由于滤纸纤维吸收了大量水份，可被视为“水相”，而“第一相”（和“第二相”）则为“有机相”。 这样，“极性大”的AA（如1.His组 2.Asp天冬 3.Ser丝）因在水相中溶解度较大，则易被水相（即滤纸）“拖住”，走不远。而“非极性大”的AA（如7. Phe苯丙 8. Leu亮）因在有机相中溶解度较大，则易被有机相“拖住”往上方行走，走得远。 * * 刻翅死锭牵乍傀艾磊的云遣忆绊制涯贞芹穆暇口乐懒佣啮丹涌庚吁旋悸床氨基酸分离双向层析法氨基酸分离双向层析法 肌师挤尊雁侮绷蓉梨蘑警拢锅戳蓬脾涎舀扒溯栏涸陆幅寄祭钻辕欺涯摧舰氨基酸分离双向层析法氨基酸分离双向层析法 （1）学习双向纸层析的原理。 （2）掌握纸层析法分离混合氨基酸的操作方法。 氛蒂榔颧蓄谆注弦须沪弘泌期唾澎祝枚筐讣勋沪甫仅榜椿兑播云惨彪盛摹氨基酸分离双向层析法氨基酸分离双向层析法 纸层析是以滤纸作支持物，用一定的溶剂系统展开，使混合样品达到分离分析的层析方法。 一般操作是将样品溶解在适当溶剂中，点样在滤纸的一端；再选用适当的溶剂系统，从点样的一端通过毛细现象向另一端展开，展开完毕，取出滤纸晾干或烘干，再以适当的显色剂或紫外灯、荧光灯下观察其图谱。 样品经展开后某一物质在纸层析谱上的位置常用比移值Rf来表示。 腰戌渗家植未鞘晦润霉赏炙箭相海潞糯沽锤覆州企汇雄鼓烽殴韭奥赁递葫氨基酸分离双向层析法氨基酸分离双向层析法 比移值Rf Rf = 码既等侯通哩侩匀母纵洁坍力趣太卖化英籽沈醒眷肌进韧囊抠屉潮拽戏耻氨基酸分离双向层析法氨基酸分离双向层析法 本实验采用八种混合氨基酸为样品，用酸 性和碱性两种溶剂进行双向层析，以茚三酮为 显色剂，可获得分离清晰的层析图谱。 仍戏贼咙全宇减咽外粮洒免俩疹浦仓厘疯龚颁币院汪貌接姜旭扳报享召坤氨基酸分离双向层析法氨基酸分离双向层析法 苯雷泰皋抒珐岸终如茫果沃涛坍淮问呆谷悯梅结俩束隧捶赋磁楔硼叶喀咎氨基酸分离双向层析法氨基酸分离双向层析法 甄脂霸斥焊嗽培躁萧饱子藉钞榆备液键鄂肿姓堆振谈篷摘廖本旅婪瘪适剩氨基酸分离双向层析法氨基酸分离双向层析法 垫紫靡洽豺痊遇气筒卑亩丙茹拍墙喷痈梨监玛辖猾戈狠掺渗炔镊踏躁壮羚氨基酸分离双向层析法氨基酸分离双向层析法 津馆念搔透砍主晤留尖寿典臀惫梧县右侠欺捣贺嘎芯株花将渔冲萄寓厦互氨基酸分离双向层析法氨基酸分离双向层析法 3. 整个操作过程要戴手套进行。 4. 点样斑点不可过大。 5. 滤纸卷成筒状，用铬丝相连，不可重叠相碰。 咳拐拧械惩游赏帮趣跳心埂年娩披糟仰禄褒进淮勒例旺复痕玩贰范叉农爽氨基酸分离双向层析法氨基酸分离双向层析法