遗传病基因诊断-2015-2016学年探讨.pptVIP

限制性片段长度多态性聚合酶链反应 * 作业 * * Identification of copy number changes by array comparative genomic hybridization (CGH) (this array includes 135,000 oligonucleotide probes). A, A patient with the 1p36 microdeletion syndrome. B, An MECP2 duplication of chromosome Xq28. (Courtesy Rodger Palmer, North East Thames Regional Genetics Service Laboratories, Great Ormond Street Hospital for Children, London.) DHPLC：变性高效液相色谱 * PAH基因-苯丙酮尿症 * 绿色方框表示父亲，紫色方框表示母亲 * SCA 脊髓小脑性共计失调 * 连锁分析的优点 不一定清楚病因基因的分子基础，只要有基因内或近旁DNA多态标记就可以分析。 缺点: 1、必须要有先证者以及家系中相关各成员的DNA才能分析。 2、携带者是杂合子时才能分析。 3、连锁分析要充分认识到由于减数分裂时同源染色体交叉互换导致误诊的可能性。 四、基因诊断-------遗传病产前诊断 1、甲型血友病（Hemophilia A）：FVIII因子遗传性缺陷所致的凝血障碍性出血性疾病. 发病率：男性的1/5000~1/10000，XR。 症状: 自然或轻微外伤后出血不止。 皮下、关节、肌肉出血----关节强直、劳动力丧失。 颅内出血可危及生命。 根据血浆中FⅧ浓度可分为轻、中、重度。 诊断、治疗 血浆代用品 分离的FⅧ因子 基因工程产品FVIII因子 基因治疗 FVIII基因于1984年克隆并定位于Xq28，全长186kb，含26个外显子，25个内含子，mRNA全长为9kb，编码2351个氨基酸。 由于致病基因突变类型复杂多样，且突变位点不集中------直接诊断受限制。 间接基因诊断 方案：先检测SRY，ZFY/ZFX基因，诊断性别后 间接诊断——连锁分析 1、首先ST14（DXS52）位点的VNTR多态； 2、FVIII基因intron 18中的Bcl I/RFLP； 3、FVIII基因intron 22中的Xba I/RFLP； 4、FVIII基因intron 13中的（CA）n多态。 直接诊断：检测i22的倒位。 2、假肥大型肌营养不良症(DMD/BMD) 肌萎缩中占60%。 由于抗肌萎缩蛋白（dystrophin）遗传性缺陷所致的进行性肌萎缩的致死性神经肌肉性遗传病。 发病率为1/3500，XR遗传。 BMD比DMD发病晚，病情轻。 主要症状：通常3---5岁发病，开始走路不稳，鸭型步态，上楼梯困难，Gower征阳性，进行性肌萎缩伴有腓肠肌假性肥大，10多岁下肢瘫，一般在20多岁之前死于心衰或呼吸衰竭。 生化检测：血清中磷酸肌酸激酶（CPK）升高。 肌电图：肌源性改变等。 1987年Kunkel等克隆DMD基因，定位于Xp21，全长2400kb，含79个外显子，cDNA长度为14kb。 目前已知DMD的50%~80%是由于DMD基因不同区段的缺失，缺失发生热点区位于DMD基因5′端（2~19）以及外显子44~52。 直接基因诊断： 应用多重PCR（multiplex PCR）检测缺失，12对引物（4?3），能检测98%缺失。 多重链接依赖探针扩增（Multiplex ligation-dependent probe amplification，MLPA ） 间接诊断: RFLP连锁分析 （CA）n连锁分析：DMD基因5 ′端和3 ′端，内含44、45、49、50中的（CA）n多态，进行单体型连锁分析。 多重PCR检测缺失 Duchenne/Becker型肌营养不良(DMD/BMD) 方法：根据DMD基因缺失的分布设计12对引物，分成3组： 第1组为外显子19、43、45、34 引物 第2组为外显子51、12、50、53 引物 第3组为外显子48、17、 8、52 引物 分别对患者基因组DNA进行扩增，每次扩增均同时设空白和正常对照。 1:DL2000marker；2:正常对照(第1组引物)；3.4:检出 外显子19的先证者和胎儿；5:正常对照(第2组引物)；6.7:检出 外显子51的先证者和胎儿；8:正常对照(第3组引物)；9.10:检出 外显子48的先证者和胎儿。 3、苯丙酮尿症（phenylketonuria，PKU） 由于苯