《小米谷糠蛋白提取分析总结报告》.docxVIP

小米谷糠蛋白提取及分析总结报告摘要：本研究采用弱碱水溶液提取和α-淀粉酶、碱性蛋白酶复合水解谷糠中的蛋白，使与淀粉结合的不溶性谷蛋白充分溶出，得到水解蛋白；然后采用固定化酵母发酵除去可溶性糖。在精制阶段，采用超滤法去除米糠清蛋白和水解蛋白中的可溶性灰分和游离氨基酸，总提取率达到87.76%.关键词：小米谷糠蛋白；提取；碱法；酶法1项目建设基本情况1.1建设基础谷子是山西主要的小杂粮作物，在我国北方及我省旱作农业中占有重要地位，每年的年产量约为14亿公斤。小米糠是谷子加工小米过程中碾下的麸皮，谷壳和胚芽的混合物，按照谷子的产量估算，我省每年约产生2亿公斤的小米糠，资源十分丰富。研究表明，小米糠中含有约18％的优质蛋白，其中包含37％的清蛋白、36％的球蛋白和22％的谷蛋白。但是在国内，绝大部分小米糠都作为动物饲料和肥料处理，没有得到合理的利用。分局国外杂志《J.AGR.FOODCHEM.》报道，小米蛋白具有抵抗化学性肝损伤的作用，但是目前我国还没有从小米或小米糠中提取抗肝损伤功能蛋白的研究的报道。1.2建设目标本项目计划以小米糠为原料，通过弱碱提取和复合酶水解方法提取小米糠蛋白，使小米谷糠中的蛋白质提取率达到85％以上，经过处理，最终得到纯度达70％以上的小米谷糠蛋白粉，为下一步进行抵抗肝损伤功能研究奠定基础。1.3建设内容与任务小米谷糠→脱脂→匀浆→弱碱浸提两次→离心（4000rpm,10min）→合并上清液→超滤浓缩→浓缩液干燥→小米糠清蛋白粉 沉淀→α淀粉酶处理→碱性蛋白酶水解→离心（4000rpm,10min）→上清液→固定化酵母发酵降糖→微滤除杂→超滤浓缩→浓缩液干燥→小米糠水解蛋白粉 2项目实施与完成情况2.1小米谷糠清蛋白提取研究以脱脂米糠为原料，采用弱碱水溶液提取小米谷糠中清蛋白，脱脂米糠先将粉碎机粉碎，然后称取10g，加蒸馏水100mL，调pH 值为7.5-8，在45-55℃下提取先后4h、3h然后 4000rpm离心10min，取上清液即为小米谷糠清蛋白。经过两因素两水平的正交实验，可以看出，用弱碱水提取小米谷糠蛋白的最佳条件为pH8,45℃，在此条件下蛋白提取率为48.34%。在pH7-11范围内,随着pH值的升高 ,蛋白质的提取率升高 ,当pH超过11后，随后再随pH值升高,提取率反而下降 ,且样品液颜色变深。这是因为米糠蛋白质中含有较多的二硫键,以及与体系中植酸、半纤维素等聚集而在弱碱性中溶解度较低, 但碱液可以使米糠蛋白质紧密结构变得疏松 ,同时碱液对蛋白质分子的次级键特别是氢键具有破坏作用 ,并可使某些极 性基团发生解离 ,使蛋白质分子表面的分子具有相同电荷 , 图1 水浴加热从而对蛋白质分子有增溶作用 ,这种增溶作用随碱性强度的增加而增大但当pH再度提高 ,蛋白质过度水解 ,提取率降低 ,同时氨基酸间有可能发生缩合反应 ,生成赖氨酸丙氨酸等有害身体健康的物质，所以本实验选择在弱碱条件下提取（pH 8）。 该过程由郜亚昆同学主要负责，在此过程中学习了设计正交试验的方法，对以后自己设计实验有很大帮助。2.2酶法提取谷糠中的谷蛋白碱性蛋白酶法可以水解谷糠中的谷蛋白，得到水解蛋白。研究选用于枯草杆菌碱性蛋白酶作为谷糠中的谷蛋白的水解酶。碱性蛋白酶的最适pH范围为8.5-9.5。在提取时间和加酶量预试验基础上，设计出米糠蛋白水解温度、水解pH、水解时间及加酶量（U/g）的四因素三水平的正交试验方案。以米糠蛋白提取率为指标，确定最佳提取条件。通过分析结果可以看出，用碱性蛋白酶提取谷糠蛋白时，影响提取率的因素大小顺序为pH加酶量时间温度；提取条件的最佳组合为A3B3C3D2，即每克脱脂小米谷糠加1500U/g的枯草杆菌碱性蛋白酶，调pH9.5,在55℃恒温水浴锅中保温7h，经验证，在此条件下小米谷糠蛋白提取率为39.42%。综合弱碱提水提蛋白和酶提蛋白在最佳条件下蛋白的总提取率为87.76%。该过程由郜亚昆同学主要负责，在此过程中学习了ph计的使用。通过本实验对以后自己的实验操作有很大的帮助。而且在此实验过程中磨练了耐心。 图2 调pH 2.3 α-淀粉酶处理小米谷糠的研究α-淀粉酶处理小米谷糠，使与淀粉结合的不溶性谷蛋白充分溶出，提高蛋白的提取率。取适量预处理得到的小米谷糠浆料，调pH值至6.0。随后按设计的正交试验方案加入α-淀粉酶水解淀粉，3500rpm离心取沉淀，在105℃下干燥至恒重后测定所得沉淀的淀粉残留量。通过极差分析可以看出，影响水解提取物中淀粉残留的因素大小为加酶量时间温度；正交试验最佳组合均为A3B3C1,即每克淀粉加200U α-淀粉酶，反应时间4h，反应温度80℃。因此，综合加工成本和性价比，最终确定本工艺加酶量为200Uα-淀粉酶/g淀粉，，反应时间4h，反应温度80℃。2.4固