《微生物检验其他革兰阴性杆菌及检验》.doc

第二十六章　其他革兰阴性杆菌及检验本章考点：　　1.概述：概念　　2.嗜血杆菌属　　●生物学性状　　●临床意义　　●微生物学检查　　3.军团菌属、鲍特菌属、布鲁菌属　　一、嗜血杆菌属　　（一）简述：　　嗜血杆菌属是一类无动力、无芽胞的革兰阴性小杆菌，常呈球杆状，有时呈杆状、长丝状等多形态。嗜血杆菌属包括16个菌种，其中与临床有关的为9个种，即流感、副流感、溶血、副溶血、嗜沫、副嗜沫、杜克、埃及、迟缓嗜血杆菌。　　嗜血杆菌须在人工培养基中加入新鲜血液才能生长，故称嗜血杆菌。因新鲜血液中含有X和V因子。X因子是血红蛋白中的一种血红素及其衍生物，为高铁血红素，是细菌合成过氧化氢酶、过氧化物酶、细胞色素氧化酶的辅基。V因子是烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD），存在于血液和某些植物组织中，是脱氢酶的辅酶。　　（二）流感嗜血杆菌　　流感嗜血杆菌，简称流感杆菌，不是流感的病原菌。　　1.生物学性状：　　（1）形态与染色：大小为（1.0～1.5）μm×（0.3～0.4）μm。急性感染标本，如脑脊液中多为短小球杆菌，恢复期病灶或长期人工传代培养后可呈球杆状、长杆状、丝状等多形态性。毒力株（粘液型菌株）在营养丰富的培养基上，6～8h有明显荚膜，在陈旧培养物中荚膜消失。无鞭毛，无芽胞。革兰染色阴性，但着色较浅。用石碳酸复红或美蓝单染色，呈现两端浓染现象。　　（2）培养特性：需氧菌。最适生长温度为35℃，最适pH为7.6～7.8。初次分离培养时，最好在5%～10%C02环境中，以促进其生长。在普通培养基中须加入X和V因子，才能生长。血液中的V因子通常处于抑制状态，经80℃～90℃热10min破坏红细胞膜上的不耐热抑制物，可使V因子释放，故流感嗜血杆菌在巧克力琼脂平板上生长较佳。培养18～24h后生长直径为0.5～0.8mm、圆形、光滑、湿润、边缘整齐，呈露滴状的小菌落。48h后可形成直径1.0～1.5mm灰白色较大的菌落。有荚膜菌株的菌落呈轻度粘稠。　　当流感嗜血杆菌与金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上共同培养时，由于后者能合成较多的V因子，可促进流感嗜血杆菌的生长。因此，在葡萄球菌菌落周围生长的流感嗜血杆菌菌落较大，离葡萄球菌菌落越远的菌落越小，此称为卫星现象，这有助于对流感嗜血杆菌的鉴定。 　　在液体培养基中，有荚膜的菌株呈均匀混浊生长，无荚膜的R型菌株则为颗粒状沉淀生长。　　（3）生化反应：本菌对糖发酵不稳定。一般分解葡萄糖只产酸，不分解乳糖或甘露醇，对麦芽糖、蔗糖或糊精的发酵不稳定。所有菌株还原硝酸盐。有荚膜菌株产生吲哚。典型菌株不溶血。产生自溶酶，可被胆汁溶解。根据流感嗜血杆菌产生吲哚，尿素酶及鸟氨酸脱羧酶反应，将其分为8个生化型。　　2.致病性：致病物质为内毒素、荚膜、菌毛和酶类。主要通过呼吸道感染，引起原发性或继发性感染。原发性感染多由b型荚膜强毒株引起，为急性化脓感染，如脑膜炎、鼻咽炎、咽喉会厌炎、化脓性关节炎、心包炎及败血症等。继发感染主要在流感、麻疹、百日咳、肺结核等感染后发生，多为无荚膜菌株引起。如慢性支气管炎、中耳炎、鼻窦炎、肺炎等。　　3.微生物学检验　　（1）标本采集：根据感染部位不同采集标本，如痰液、脑脊液、鼻咽分泌物及脓液等。　　（2）检验方法　　1）直接镜检：痰液、脓液等标本可直接涂片，脑脊液可取离心沉淀物涂片，革兰染色镜检。如查到革兰阴性短小杆菌或多形态杆菌，结合临床症状，作初步诊断。　　2）分离培养与鉴定：将血液、脑脊液标本先增菌培养后，再转种巧克力琼脂平板或选择性巧克力琼脂平板，经37℃培养24～48h。根据菌落形态、涂片染色、卫星现象，X、V因子需求与否，定种，再作生化试验和荚膜肿胀试验分型。　　3）如何提高流感嗜血杆菌的阳性率：　　①初次培养应在5%～10%C02环境。　　②生长需要X、V因子，故在培养基中应添加此因子。　　③应用选择性培养基，如巧克力琼脂中加一定量抗生素，1ml培养基中含万古霉素50μg，杆菌肽300μg，氯林可霉素1μg，嗜血杆菌分离率可达96.7%。　　4.治疗：若β-内酰胺酶阴性则首选氨苄青霉素、阿莫西林，次选TMP-SMZ，二、三代头孢菌素，红霉素，氨曲南，β-内酰胺酶阳性提示对青霉素，氨苄西林和阿莫西林耐药。　　（三）其他嗜血杆菌 菌种 Ⅹ因子 Ⅴ因子 溶血性 致病性 流感嗜血杆菌 + + - 原发性化脓性感染及继发性感染等 副流感嗜血杆菌 - + - 偶可引起细菌性心内膜炎、尿道炎 埃及嗜血杆菌 + + - 急性、亚急性眼结膜炎 杜克嗜血杆菌 + - +/- 软性下疳（性传播疾病） 嗜沫嗜血杆菌 + - - 偶引起细菌性心内膜炎或脑脓肿 溶血性嗜血杆菌 + + + 很少致病二、军团菌属　　1.命名和分类：1976