《微生物检验临床标本微生物学检验概述》.doc

第三十四章　临床标本微生物学检验概述本章考点：　　临床标本微生物学检验（血液、脑脊液、痰、尿液、粪便、性传播疾病、创伤）　　（1）常见病原菌　　（2）标本采集及运送　　（3）检验方法　　（4）临床意义　　一、临床标本细菌检验的基本程序二、血液感染　　正常人的血液是无菌的。　　菌血症是指在血液中可检测到细菌，包括一过性和持续性在血中存在。　　败血症是指病原菌侵入血流后，在其中大量繁殖并产生毒性产物，引起全身中毒症状。　　脓毒血症是指化脓性细菌败血症时，细菌通过血流扩散至全身其他组织或器官，产生新的化脓性病灶。　　（一）常见病原菌见表5-34-1（二）标本采集　　1.采血时间和频率：一般在病人发热初期或高峰期采集，或根据不同的发热情况在未用抗生素前采集。但怀疑细菌性心内膜炎时，血培养不少于三次。　　2.采血量：一般为静脉采血，采血量一般以培养液体积的1/10为宜。成人采血量10～20ml，儿童3～5ml；婴儿1～2ml。　　3.床边直接注入血液培养基，否则用SPS抗凝剂送检，不得用EDTA，枸橼酸钠抗凝。　　4.检查血管内导管有无细菌污染，可无菌操作，剪下导管5cm远侧段，置无菌容器内送检。　　（三）微生物分离培养和鉴定　　1.培养基的选择：为提高阳性率通常先用增菌培养基培养。用自动血培养分析仪时选用相应的血培养瓶，如需氧+厌氧，需氧+高渗等。　　2.分离和鉴定：当观察有细菌生长时或血培养仪阳性报警时，应及时作如下检验：　　（1）涂片染色镜检，结果及时与临床联系。　　（2）转种血平板、巧克力平板、厌氧血平板或其他特殊培养基等分离培养纯菌再进行鉴定。　　（3）同时做药敏试验，结果及时报告临床作治疗参考。　　（四）报告方式　　阴性结果：7天报告无细菌生长。疑为亚急性细菌性心内膜炎、布鲁菌病、厌氧菌血症、真菌血症时，血培养至少连续培养2～3周，仍无细菌生长者可报告为阴性。　　阳性结果：三级报告方式：　　第一级报告告知标本已出现阳性并报告直接细菌涂片结果，同时做初步药敏试验；　　第二级是报告初步药敏结果，同时做正式鉴定和药敏试验；　　第三级报告正式鉴定和药敏试验结果。　　（五）临床意义　　葡萄球菌菌血症常由疖、痈、脓肿及烧伤创面等原发感染灶继发，也可由呼吸道感染引起。一些革兰阴性杆菌主要侵犯、危及机体免疫功能低下的病人。耐药菌株不断增加。厌氧菌的菌血症常合并需氧菌感染，临床症状较重而复杂。L型菌的菌血症主要由于使用抑制细菌细胞壁合成的抗生素后，由缺损细胞壁的细菌感染所致。免疫低下者常出现真菌菌血症。院内感染菌血症不断上升。　　三、中枢神经系统感染　　（一）常见病原菌见表5-34-2（二）标本采集　　用药前，无菌操作腰穿方法采集2～3ml，盛于无菌试管常温下立即送检。天冷时保温，不可冰箱保存。用于病毒检测时应冷藏送检。　　（三）检验方法　　1.涂片镜检：离心3000rpm／min，15分钟。　　革兰染色（一般细菌）、抗酸染色（分枝杆菌）、墨汁染色（隐球菌）、电镜检查（病毒颗粒）。　　2.分离培养：5g／L葡萄糖增菌肉汤、血平板、中国蓝琼脂平板或麦康凯琼脂平板、巧克力平板。结核菌接种罗-琴培养基或米氏7H10培养基。真菌培养接种沙氏培养基。病毒培养常用动物接种、鸡胚接种、细胞培养。　　3.血清学检测可直接检测抗原。　　（四）临床意义　　细菌性脑膜炎是中枢神经系统感染的常见类型。真菌性脑膜炎最常见于隐球菌脑膜炎，其他的真菌性脑膜炎如白假丝酵母、球孢子性脑膜炎日渐增多，特别是免疫功能低下和恶性疾病患者易发。流行性乙型脑炎可获得持久免疫力，再次发病者极少见。肠道病毒对中枢神经系统的危害性逐渐引起人们的关注和重视。　　四、呼吸道感染　　呼吸道按解剖结构分为上呼吸道和下呼吸道。上呼吸道感染主要指喉及喉以上的呼吸道感染。下呼吸道感染主要指气管、支气管和肺的感染。　　（一）上呼吸道的正常菌群见表5-34-3（二）常见病原菌见表5-34-4（三）标本采集　　（1）上呼吸道常采用鼻咽拭子，用可弯曲的拭子，在鼻咽腔转动数次采集标本，置运输培养基中送检。在扁桃体部位、咽后壁及口腔内炎症、溃疡或渗出部位采样时，应先用清水漱口，再采集标本。　　（2）下呼吸道常采用自然咳痰法、支气管镜采集、胃内采集、咽拭子。清晨第一口痰为宜，最好在用抗菌药物前采集，必须先用清水漱口，避免唾液混入。立即送检。　　（四）检验方法　　1.涂片：检查细菌常用革兰染色、抗酸染色。检查隐球菌采用墨汁染色，军团菌、支原体、病毒等可用免疫荧光抗体染色。　　痰涂片革兰染色还可用于判定痰标本的质量。合格的痰标本应是含白细胞、脓细胞和支气管柱状上皮细胞较多，而受污染的痰标本则是来自颊黏膜的扁平上皮细胞较多。