《微生物检验分支杆菌属及检验》.doc

第二十四章　分支杆菌属及检验本章考点：　　1.概述：概念　　2.结核分枝杆菌　　●生物学性状　　●临床意义　　●微生物学检查及方法学评价　　3.非典型分支杆菌　　●概念、种类　　●鉴别培养方法　　●检验方法学评价　　4.麻风分支杆菌：概述　　分枝杆菌属是①一类细长或略带弯曲、为数众多（包括54个种）呈分支状生长的需氧杆菌。因其繁殖时呈分支状生长故称分枝杆菌。本属细菌的主要特点②是细胞壁含有大量脂类，可占其干重的60%，这与其染色性、抵抗力、致病性等密切相关。③一般不易着色，若经加温或延长染色时间而着色后，能抵抗3%盐酸酒精的脱色作用，故又称抗酸杆菌。④需氧生长，⑤无鞭毛，无芽胞和荚膜。引起的疾病均为慢性，有肉芽肿病变的炎症特点。　　分枝杆菌的种类较多，包括结核分枝杆菌、非典型分枝杆菌和麻风分枝杆菌。　　一、结核分枝杆菌　　结核分枝杆菌简称结核杆菌，是引起人和动物结核病的病原菌。目前已知在我国引起人类结核病的主要有人型和牛型结核分枝杆菌。　　（一）生物学特性　　1.形态与染色：结核分枝杆菌为细长或略带弯曲的杆菌，其大小约（1～4）μm×0.4μm。在培养基中可呈球状或丝状，陈旧培养物或干酪化的淋巴结中可见到分枝状。抗酸染色时菌体呈红色。显微镜下常堆积成团、成束，排列无序，也有呈链状、索状者。革兰染色阳性，既往在组织中曾发现革兰阳性的非抗酸颗粒，接种动物可产生典型的结核病变，后被称为Much颗粒。金胺“0”等染色，在荧光显微镜下菌体可发生荧光。　　2.培养特性：本菌专性需氧，在无氧条件下迅速死亡，在5%～10%C02环境中可刺激其生长。烛缸不适合本菌培养，需用二氧化碳培养箱。培养温度适应范围较大，35～40℃均可生长，最适温度为35～37℃。最适pH为6.5～6.8。兼性胞内寄生菌，在细胞内外均可发育繁殖，强毒株可长期生存于巨噬细胞内。生长时还需适当的湿度。本菌生长缓慢，最快的分裂速度为18h一代。　　在固体培养基上，一般需2～6周才能长出菌落。菌落呈干燥颗粒状，不透明，乳白色或米黄色，表面呈皱纹状，形似菜花。　　在液体培养基中生长较快，多为表面生长，形成菌膜，且干燥易碎而沉于管底。此种特性与菌体的疏水性有关。有毒力菌株在液体培养基中可呈索状生长，无毒株则无此现象。　　结核分枝杆菌营养要求较高，必须在血清、卵黄、马铃薯、甘油以及某些无机盐类的特殊培养基（罗氏培养基）上才能生长。但经多次传代或长期保存的菌种，也能在营养较简单的培养基中生长。　　据报道少量铁质可促进结核分枝杆菌生长，铁质可使细菌产生分枝杆菌生长素。选择培养基加有抗微生物药物，以抑制标本中杂菌、真菌等污染菌的生长。常用的选择剂有结晶紫、孔雀绿、青霉素、萘啶酸、林可霉素、多粘菌素B等。　　3.生化反应：各型结核杆菌均不发酵糖类，能产生过氧化氢酶，耐热触酶试验、聚山梨酯-80水解试验和耐热磷酸酶试验均为阴性，脲酶试验和中性红试验均为阳性。人型结核分枝杆菌烟酸试验、硝酸盐还原和烟酰胺酶试验均为阳性，借此可与牛型结核分枝杆菌鉴别。　　4.抵抗力：对酒精敏感。　　5.变异性：形态、菌落、毒力、免疫原性和耐药性等变异。　　毒力变异：卡介苗（BCG）——将有毒的牛型结核分枝杆菌培养于含有甘油、胆汁、马铃薯的培养基中经13年传种230代，获得减毒菌株，再接种动物，不能致病而使其获得免疫力。用于预防结核病。　　（二）临床意义　　1.致病性：该菌不产生内毒素和外毒素和侵袭性酶。可在细胞内、外生长与大量繁殖，致病物质主要是荚膜、脂质、蛋白质。结核分枝杆菌主要通过呼吸道、消化道和受损伤的皮肤侵入易感机体，引起多种组织器官的结核病，其中以通过呼吸道引起的肺结核最多见。肺部感染可分为原发性感染和继发性感染。肺外感染可发生在脑、肾、肠、及腹膜等处。机体对菌体成分和其代谢产物引起免疫损伤以及变态反应，从而导致一系列组织学上的病理变化。（机理）　　2.Koch现象：机体对结核分枝杆菌的特异性免疫和迟发型超敏反应同时存在。结核的特异性免疫是通过结核分枝杆菌感染后所产生，试验证明，将有毒结核分枝杆菌纯培养物初次接种于健康豚鼠，不产生速发型过敏反应，而经10～14d，局部逐渐形成肿块，继而坏死，溃疡，直至动物死亡。若在8～12周之前给动物接种减毒或小量结核分枝杆菌，第二次接种时则局部反应提前，于2～3d内发生红肿硬结，后有溃疡但很快趋于痊愈。此现象为Koch在1891年观察到的，故称为Koch现象。免疫性和迟发型超敏反应由不同的T细胞亚群介导。　　3.结核菌素试验：利用Ⅳ型变态反应的原理，检测机体是否感染过结核杆菌。本实验对婴幼儿结核病的诊断有意义。　　（三）微生物学检验　　1.标本采集：根据感染部位的不同，可采集不同标本。结核患者各感染部位的标