中南民族大学研究生酶学第七章多底物酶反应动力学..docVIP

第七章 多底物酶反应动力学 多底物酶占所有酶的一半以上。见下表： 表 酶反应按底物数的分类 反应底物数 酶类型 酶催化反应式 占总酶数的% 单底物反应 异构酶 AB 5 单向一底物反应 裂合酶 AB + C 12 假单底物反应 水解酶 A-B + H2OA-OH + BH 26 双底物反应 氧化还原酶 AH2 + BA + BH2 27 基团转移酶 A + BXAX + B 24 三底物或多底物反应 连接酶 X + Y + ATPX-Y + ADP + Pi 6 X + Y + ATPX-Y + AMP + PPi 7.1 双底物酶反应机制 7.1.1 顺序机制ordered mechanism 此机制有三元复合物生成，大部分脱氢酶属于顺序机制。 7.1.2 Theorell Chance机制 此机制也属顺序机制，只是没有三元复合物生成。如肝醇脱氢酶，A为NAD+，B为乙醇，P为乙醛，Q为NADH。 7.1.3 随机机制random mechanism 许多激酶的催化机制属于此类。 7.1.4 乒乓机制ping pong mechanism 转氨酶、转磷酸酶、转酰基酶属于此机制。 7.2 双底物顺序反应动力学 7.2.1 反应模式 7.2.2 速度方程推导 按快速平衡法，如果k4、k5 k－1、k－2，则总反应的限速步骤为EAB的生成，故可将反应模式简写成： ， ， ， ， 分子分母同乘以[A][B]得 ， ， ， ， 分子分母同乘以[A][B]得 a．当[A]固定，[B]可变时，速度方程可写成： ，此方程形式与米氏方程相同。 b．当[B]固定，[A]可变时，速度方程可写成： ，此方程形式也与米氏方程相同。 7.2.3 讨论 a．固定两种反应物中的任一种，都可以使速度方程写成米氏方程的形式；两种反应物浓度都变化时，则不为米氏方程的形式。 b．当[A]固定，[B]可变时，[A]影响表观米氏常数，不影响最大反应速度。 c．当[B]固定，[A]可变时，[B]既影响表观米氏常数，又影响最大反应速度。 7.2.4 作图法求动力学参数 7.2.4.1 [A]固定，[B]可变时 a．双倒数作图 ， 此直线的横轴截距＝。 b．斜率对再作图 斜率＝ 此直线的横轴截距＝。 c．横轴截距绝对值的倒数对再作图 此直线的横轴截距＝。 7.2.4.2 [B]固定，[A]可变时 a．双倒数作图 在不同的[B]下以对作出不同的直线， 这些直线交于第三象限的一点，交点坐标为，横轴截距＝。 b．纵轴截距对再作图 纵轴截距＝ 此直线的横轴截距＝。 c．横轴截距的绝对值对[B]再作图 ｜横轴截距｜＝ 此直线的横轴截距＝。 7.3 Theorell Chance机制动力学 7.3.1 反应模式 7.3.2 速度方程推导 用稳态法处理： 1．， 2．， …………①， …………②， ①式除以②式得 固定[A]，改变[B]时： ，与米氏方程形式相同。 固定[B]，改变[A]时也类似。