高中生物选修3—现代生物科技专题知识点总结.doc

生物选修3 专题1 基因工程 1.1 DNA重组技术的基本工具 1.2 基因工程的基本操作程序 一、与DNA分子相关的几种酶及基因工程的其他工具 1、与DNA分子相关的酶 限制酶 DNA连接酶 DNA聚合酶 解旋酶 作用底物 DNA分子 DNA分子片段 脱氧核苷酸 DNA分子 作用部位 磷酸二酯键 磷酸二酯键 磷酸二酯键 碱基对间的氢键 作用结果 形成粘性末端或平末端 形成重组DNA分子 形成新的DNA分子 形成单链DNA分子 “分子手术刀”——限制性核酸内切酶（限制酶） （1）来源：主要是从原核生物中分离纯化出来的。 （2）功能：能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，因此具有专一性。 （3）结果：经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式：黏性末端和平末端。 “分子缝合针”——DNA连接酶 (1)两种DNA连接酶（E·coliDNA连接酶和T4DNA连接酶）的比较： ①相同点：都缝合磷酸二酯键。 ②区别：E·coliDNA连接酶只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间的磷酸二酯键连接起来；而T4DNA连接酶能缝合黏性末端和平末端，但连接平末端的效率较低。 与DNA聚合酶作用的异同:DNA聚合酶只能将单个脱氧核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯键。DNA连接酶是连接两个DNA片段的末端，形成磷酸二酯键。 2、载体 （1）条件： ①能在宿主细胞中稳定保存下来并大量复制。 ②有一个至多个限制性核酸内切酶切割点，以便与外源基因连接。 ③具有特殊的标记基因，便于筛选。 （2）种类： 质粒（常用）、γ噬菌体的衍生物、动植物病毒。 （3）作用： ①作为运载工具，将目的基因转移到宿主细胞内； ②利用它在宿主细胞内对目的基因进行大量复制。 二、基因工程基本操作程序 1、目的基因的获取途径（目的基因主要是编码蛋白质的结构基因也可是调控作用的因子） （1）从基因文库中获取 （2）人工合成目的基因。人工合成目的基因的常用方法有反转录法和化学合成法。（原核基因采取直接分离获得，真核基因是人工合成。） （3）PCR技术扩增目的基因 ①原理：DNA双链复制 ②过程： 第一步：加热至90～95℃使双链DNA解链； 第二步：冷却到55～60℃，引物结合到互补DNA链； 第三步：加热至70～75℃，热稳定DNA聚合酶（Taq酶）从引物起始互补链的合成。 2、基因表达载体的构建 （1）目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传至下一代；使目的基因能够表达和发挥作用。 （2）组成：目的基因＋启动子＋终止子＋标记基因 ①启动子：是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的首端，是RNA聚合酶识别和结合的部位，能驱动基因转录出mRNA，最终获得所需的蛋白质。 ②终止子：也是一段有特殊结构的DNA片段 ，位于基因的尾端。 ③标记基因的作用：是为了鉴定受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来。 3、将目的基因导入受体细胞 生物种类 植物细胞 动物细胞 微生物细胞 常用方法 显微注射技术 受体细胞 体细胞 多是受精卵 原核细胞 转化过程 将目的基因插入Ti质粒的T—DNA上→农杆菌→导入植物细胞→整合到受体细胞的DNA→表达 将含有目的基因的表达载体提纯→取卵（受精卵）→显微注射→受精卵发育→获得具有新性状的动物 Ca2＋处理细胞→感受态细胞→重组质粒与感受态细胞混合→感受态细胞吸收重组DNA分子 4、目的基因的检测与鉴定 （1）分子水平检测 ①导入检测即转基因生物的染色体DNA上是否插入了目的基因：DNA分子杂交技术，即使用放射性同位素标记的含目的基因的DNA片段作探针。 ②转录检测即检测目的基因是否转录出了mRNA：分子杂交法，即目的基因作探针与mRNA杂交 (翻译检测即检测目的基因是否翻译成蛋白质：抗原─抗体杂交法 （2）个体生物学水平鉴定：对转基因生物进行抗虫或抗病的接种实验。 1.3 基因工程的应用 1.4 蛋白质工程的崛起 一、基因工程的成果 1.植物基因工程：抗虫、抗病、抗逆转基因植物，利用转基因改良植物的品质。 2.动物基因工程：提高动物生长速度、改善畜产品品质、用转基因动物生产药物。 3.基因治疗：把正常的外源基因导入病人体内，使该基因表达产物发挥作用。 二、蛋白质工程与基因工程的比较 蛋白质工程 基因工程 区别 过程 预期蛋白质功能→设计预期的蛋白质结构→推测应有的氨基酸序列→找到相对应的脱氧核苷酸序列（基因修饰或基因合成） 获取目的基因→构建基因表达载体→将目的基因导入受体细胞→目的基因的检测与鉴定 实质 定向改造或生产人类所需的蛋白质 定向改造生物的遗传特性，以获得人类所需的生物类型或生物产