第十一章动物细胞培养生物制药预案.pptVIP

1、组织块原代培养 组织块原代培养是比较常用的简易的原代培养方法，也是早期动物细胞培养方法。以培养瓶培养为例： （1）剪刀剪碎组织形成1mm2的组织块，用吸管吸出组织块一一放入培养瓶内，一般每小块间隔为0.2-0.5厘米，使其均匀贴在培养瓶的壁上。 （2）然后将贴有组织块的瓶壁朝上，加入培养液，塞上瓶塞，倾斜置于37℃的CO2培养箱内培养2-4小时后，将培养瓶缓慢翻转平放，静置培养。24小时后补充培养液，一般3-5天更换培养液。 （3）一般情况下，组织块贴壁后24小时细胞就从组织块四周长出，5-7天组织块中央的组织细胞逐渐坏死脱落，组织块四周的贴壁细胞也逐渐形成层片。 2、细胞原代培养 酶解制备单细胞：根据不同的组织对象采用适当的酶消化液获得动物细胞进行培养。 胚胎等组织细胞潜伏期短，第二天既可见生长，一周便可接连成片；成体组织来源的细胞潜伏期长，一般要一周左右。 最常用的酶解液有胰蛋白酶和胶原酶，链霉蛋白酶、粘蛋白酶、蜗牛酶等也可用于动物细胞的消化。EDTA适合消化传代细胞，常与胰蛋白酶一起使用。 热消化 冷消化 动物细胞传代培养 传代培养（Passage culture/Subculturing）是指将原代培养的细胞继续转接培养的过程。细胞的体外大量增殖以及细胞系的建立是通过传代培养实现的。 注意：每进行一次分离再培养称为传一代。这里的传代代数与细胞代数或倍增不同，“一代”是指