dl-96试剂l sop文件.docVIP

【目的】 规范DL-96细菌测定系统随机体外诊断试剂操作规程，保证检验质量。 【该SOP变动程序】 本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。 【原理】 试剂板由生化反应孔和抗菌药物MIC测定孔组成。在生化反应孔中加入细菌悬液，经35-37℃孵育，在细菌代谢作用下生化反应直接颜色变化或经加入显色剂后产生颜色变化；抗菌药物MIC采用微量肉汤稀释法，加入还有细菌的MH肉汤培养基，经35-37℃孵育，根据试验孔是否出现浑浊（沉淀）确定细菌是否生长。测定系统采用比色法对各项生化反应进行结果判定，根据细菌生化反应的概率来完成细菌的鉴定；测定系统通过比浊法对抗生素进行MIC半定量测定分析MIC值。 【操作程序】 1 使用本试剂板的基本要求： 1.1无特殊营养要求的革兰氏阳性菌、革兰阴性菌和真菌等病原菌 1.2 18-24小时分离培养的单个纯菌落（或纯培养物）。 2 随机试剂板的选择： 2.1根据待测菌的培养特性、菌落特征、氧化酶实验、触酶试验结果以及革兰染色情况，选择好相应的试剂板。 2.2试剂板的选择DL-96E 、DL-96NE、 DL-96STAPH、DL-96STREP、DL-96FUNGUS 3试剂板的接种 3.1 菌悬液与药敏液的配置 菌悬液制备：挑取纯培养单个菌落于稀释液瓶内壁研磨呈细菌悬液，要求如下： DL-96E 、DL-96NE、 DL-96STAPH的菌悬液都制备0.5麦氏单位； DL-96STREP菌悬液制备2麦氏单位； DL-96FUNGUS菌悬液都制备1麦氏单位； 药敏液的配置：具体请见细菌测定系统随机体外诊断试剂板使用说明书 3.2 试剂板的接种 3.2.1 DL-96E试剂板:适用于氧化酶试验阴性的革兰氏阴性杆菌的鉴定和抗菌药物MIC测定。 3.2.1.1菌悬液制备：挑取纯培养单个菌落于稀释液瓶内壁研磨呈细菌悬液（0.5麦氏单位）。 3.2.1.2用连续移液器 （配无菌移液吸头）吸取该菌悬液加入试剂板A1-A12、B1-B12和C1—C4孔内，每孔100μl。 3.2.1.3在A1-A7孔分别滴加无菌石蜡油2滴。 3.2.1.4吸菌悬液50μl，加至肉汤培养基内，充分混匀，继续加入试剂板的其余各孔（所有的抗菌药物MIC测定试验孔及生长对照孔C+），每孔100μl。 3.2.1.5剩余的菌液及吸头浸入杀菌溶液内浸泡灭菌。 3.2.2 DL-96NE试剂板:适用于氧化酶试验阳性或氧化酶试验阴性但厌氧葡萄糖不产酸的革兰氏阴性杆菌的鉴定和抗菌药物MIC测定。 3.2.2.1菌悬液制备：挑取纯培养单个菌落于稀释液瓶内壁研磨呈细菌悬液（0.5麦氏单位）。 3.2.2.2用连续移液器（配无菌移液吸头）吸取该菌悬液加入试剂板A1-A12和B1-B12孔内，每孔100μl。 3.2.2.3在A1-A7孔分别滴加无菌石蜡油2滴。 3.2.2.4吸取菌悬液50μl，加至肉汤培养基，充分混匀，继续加入试剂板的其余各孔（所有的抗菌药物MIC测定试验、生长对照孔C+及6.5%NaCl），每孔100μl。 3.2.2.5剩余的菌液及吸头浸入杀菌溶液内浸泡灭菌。 3.2.3 DL-96STAPH试剂板：适用于触酶试验阳性的革兰氏阳性球菌的鉴定和抗菌药物MIC测定。 3.2.3.1菌悬液制备：挑取纯培养单个菌落于稀释液瓶内壁研磨呈细菌悬液（0.5麦氏单位）。 3.2.3.2用连续移液器（配无菌移液吸头）吸取该菌悬液加入试剂板A1-A12和B1-B10孔内，每孔100μ1。 3.2.3.3在A1-A3孔分别滴加无菌石蜡油2滴。 3.2.3.4吸菌悬液50μl，加至肉汤培养基内，充分混匀，继续加入试剂板的其余各孔（所有的抗菌药物MIC测定试验孔及生长对照孔C+），每孔100μl。 3.2.3.5剩余的菌液及吸头浸入杀菌溶液内浸泡灭菌。 3.2.4 DL-96STREP试剂板:适用于触酶试验阴性的革兰氏阳性球菌的鉴定和抗菌药物MIC测定。 3.2.4.1 记录菌落溶血类型（α-溶血、β-溶血）。 3.2.4.2挑取纯培养单个菌落于0.3ml无菌水中，混匀。 3.2.4.3将以上菌悬液浇于或用无菌棉拭子均匀涂于血平皿上。 3.2.4.4对于β-溶血链球菌和肠球菌，经以上24小时孵育，一般能形成较大的菌落，对于其它链球菌需经48小时孵育才可形成较大的菌落。对于某些对营养要求极高的苛养菌，则取菌落于链球菌专用培养液（1ml）中35-37℃孵育5小时，将以上菌悬液均匀浇于血平皿上, 再置35-37℃ 孵育18-24小时。 3.2.4.5菌悬液制备：挑取纯培养单个菌落于稀释液瓶内壁研磨呈细菌悬液（2麦氏单位）。 3.2.4.6用连续移液器（配无菌移液吸头）吸取该菌悬液加入